[发明专利]快速检测鸭瘟病毒LAMP试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速检测鸭瘟病毒LAMP试剂盒。本发明构建了一套完整的LAMP体系，LAMP扩增法可使用水浴锅或保温杯进行扩增，结果肉眼可见，操作相对简单，特别适合基层现场检疫，且敏感性高。检测时间(含样品处理时间)由原来的3‑4h缩短为2h，其检测限达1pg/mL，特异性为100％，无假阳性和假阴性出现。利用该试剂盒与DPV病原PCR检测方法(GB/T 22332‑2008)分别检测200个病鸭样品中的鸭瘟病毒，两种方法的符合率达100％。本发明试剂盒具有高效、特异性强和敏感性高等特点，可满足大批量样品快速检测的要求。因此建立的LAMP诊断方可进行现场快速检测，并且结果准确，使用方便。

主权项

一种快速检测鸭瘟病毒LAMP试剂盒，其特征在于：在25μL体系DPV‑TK LAMP扩增体系中包括，浓度为5mol/L的甜菜碱5μL，浓度为8000U/mL Bst DNA的聚合酶0.8μL，浓度为0.1mol/L的硫酸镁1.0μL，浓度为0.25mol/L的dNTPs 1.4μL，浓度为10p mol/μL的外引物F3/B3各0.5μL，浓度为10pmol/μL的内引物FIP/BIP各4.0μL，DNA模板1μL，1μL BYBR Green Ⅰ，其余由无核酸酶ddH2O补足至25μL，其中，外引物F3的序列为5’‑TGCGAA CGCTTAATCCGG‑3’，外引物B3的序列为5’‑TGCTATGTCAC CTCGAGCT‑3’；内引物FIP的序列为5’‑GGTTTTGCCAGTTCCATACGGC‑TTTT‑CCTTCGATGCCATTATGCCT‑3’，内引物BIP的序列为5’‑GGTTTTGCCAGTTCCATACGGC‑TTTT‑CCTTCGATGCCATTATGCCT‑3’；该体系在62℃扩增60min。