[发明专利]一种RANKL-TNF样区融合蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 201710073236.1 | 申请日： | 2017-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN107056949B | 公开（公告）日： | 2021-03-12 |
| 发明（设计）人： | 朱思品;徐家科;周杰;肖健;张宏宇;李校堃 | 申请（专利权）人： | 徐家科 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 张黎 |
| 地址： | 澳大利亚西澳大利亚*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种RANKL‑TNF样区融合蛋白的制备方法。RANKL是由成骨细胞和内皮细胞分泌的一种重要细胞因子，其在骨重建中发挥重要功能。本发明包括五个步骤：步骤一、获取RANKL功能片段。步骤二、利用RANKL功能片段和载体获得质粒溶液。步骤三、将步骤二得到的质粒载体克隆后转化为BL21菌液。步骤四、对步骤三获得的BL21菌体进行诱导，得到RANKL‑TNF样区融合蛋白溶液。步骤五、对步骤四获得的RANKL‑TNF样区融合蛋白溶液进行蛋白纯化。本发明采用一种低温且低IPTG浓度的诱导条件，表达出了具有高活性的可溶性目的蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 rankl tnf 融合 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种RANKL‑TNF样区融合蛋白的制备方法，包括五个步骤；其特征在于：步骤一、获取RANKL功能片段SEQ NO.1，RANKL功能片段SEQ NO.1含有160位精氨酸到318位色氨酸；步骤二、利用RANKL功能片段SEQ NO.1和载体获得质粒溶液，所述的载体为pGST‑4T系列载体；步骤三、将步骤二得到的质粒溶液克隆后转化为BL21菌液；步骤四、在IPTG终浓度为0.1～0.5mM，且温度为16～25℃的条件下对步骤三获得的BL21菌体进行诱导；得到RANKL‑TNF样区融合蛋白溶液；步骤五、对步骤四获得的RANKL‑TNF样区融合蛋白溶液进行蛋白纯化；获得RANKL‑TNF样区融合蛋白。
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