[发明专利]一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域，提供了一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管作为检测抗体标记物，实现了鳞状细胞癌标志物SCCA的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低，对鳞状细胞癌的检测具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

1.一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1） 将直径为3 ~ 5mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2） 取6 µL、1.0 ~ 2.0mg/mL的Au@还原石墨烯滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；（3） 继续将6 µL、5 ~ 15 µg/mL的鳞状细胞癌标志物捕获抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；（4） 继续将3 µL、1.5 ~ 3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；滴加6µL、0.0005 ~ 50ng/mL的一系列不同浓度的鳞状细胞癌抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥；（5） 将6 µL、2.0~ 3.0 mg/mL的海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面，置于4℃冰箱中晾干，制得一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器；所述海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液的制备，包括以下步骤： j 氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管的制备将0.5 ~ 1.5 g 碳纳米管置于250mL三口烧瓶中，依次加入60 mL的浓硫酸和20 mL的浓硝酸，在100℃下油浴加热反应2 h，冷却至室温后，将所得悬浊液移入500 mL烧杯，加300 mL超纯水稀释，抽滤，用超纯水洗涤至滤液成中性，所得固体在60˚C真空干燥箱内干燥10 ~ 14 h，制得磺化碳纳米管；将4 ~ 8 mg上述磺化碳纳米管和15 ~ 30 mg (NH4)2MoS4溶解在15 ~ 30 mL二甲基甲酰胺中，超声30 min后，在210℃条件下反应18 h，冷却至室温，离心、超纯水、无水乙醇分别洗涤三次， 60℃下干燥24 h，得到二硫化钼掺杂磺化碳纳米管；将0.1 ~ 0.3 g 上述二硫化钼掺杂磺化碳纳米管置于10 mL无水乙醇中超声10 min，在搅拌条件下缓慢加入 0.1 ~ 0.3 mL 3‑氨丙基三乙氧基硅烷， 70℃下搅拌反应1.5 ~ 2 h，冷却至室温，离心、超纯水、无水乙醇分别洗涤三次， 60℃下干燥24 h，得到氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管；k 海胆状金钯纳米粒子的制备将1 ~ 2mL、质量分数为1%的 HAuCl4加入到99mL超纯水中，油浴加热到120℃，搅拌30 min，然后加入10 mL、质量分数为1%的柠檬酸钠，加热20 ~ 30 min后，制得金纳米粒子溶液；取10mL 金纳米粒子溶液在8000 ~ 10000 rpm条件下，离心6 ~ 10 min，将所得沉淀物分散在10 mL含0.05 moL.L‑1的十六烷基三甲基溴化铵和0.0126 moL.L‑1的5‑溴水杨酸的混合溶液中，离心，超纯水洗涤三次,再分散到10 mL超纯水中备用；将上述分散好的10 mL溶液和40 ~ 60 mL 1 m moL.L‑1的H2PdCl4溶液依次加入到100 mL的圆底烧瓶中，超声1 ~ 3 min，加入10 ~ 15 mL、10 m moL.L‑1的抗坏血酸溶液，倒置10 ~ 30 s，静置6 h，离心、超纯水洗涤三次，室温下干燥24h, 制得海胆状金钯纳米粒子；将50mg海胆状金钯纳米粒子分散到50mL超纯水中，制得1 mg.mL‑1的海胆状金钯纳米粒子溶液备用；l 海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液的制备将20 ~ 30 mg上述步骤（1）制备的氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管倒入20 ~ 40 mL、1 mg.mL‑1的海胆状金钯纳米粒子溶液中，超声1 h，过滤，室温下干燥20 ~ 24h，制得海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管；将4~ 6 mg的海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管分散到1 ~ 2 mL超纯水中，加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的鳞状细胞癌标志物检测抗体溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液，在4˚C恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；在4˚C下，6000 rpm转速下离心10 ~ 15 min，得到下层沉淀物，加入1 mL、50mmol/L 的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液，制得海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液，4˚C下保存备用。