[发明专利]一种大规模继代培养天山雪莲细胞的工艺在审
| 申请号： | 201710078816.X | 申请日： | 2017-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN106867958A | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 张桂才;何乐雨;何俊雄;侯蒙蒙;刘晓月;刘永彬;张卫 | 申请（专利权）人： | 天津艾赛博生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12M1/04;C12M1/10 |
| 代理公司： | 天津合志慧知识产权代理事务所(普通合伙)12219 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区开发区洞庭路*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 一种大规模继代培养天山雪莲细胞的工艺，包括以下步骤1)天山雪莲细胞系筛选采用天然雪莲试管苗进行外植体诱导，获得愈伤组织；2)摇瓶规模继代培养挑选生长状态良好，颜色鲜亮，质地紧实的固体细胞放入含有培养液的摇瓶中，每7‑10天继代一次；3)摇瓶转反应器继代培养将摇瓶中细胞转接到反应器中进行继代培养，每次继代培养的培养周期为7‑10天，培养条件为23‑25℃，光周期为16h/8h，光照强度为1000‑3000Lux，通气保持反应器中培养液的溶氧浓度在2‑6mg/L。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大规模 培养 天山 雪莲 细胞 工艺 | ||
【主权项】：
一种大规模继代培养天山雪莲细胞的工艺，其特征在于所述工艺包括以下步骤：1)天山雪莲细胞系筛选：采用天然雪莲试管苗进行外植体诱导，获得愈伤组织，对固体细胞进行Ser‑137、uv‑B诱变，低温4℃处理，将MS培养基的含糖量提高至50‑100g/L后作为筛选培养基，以筛选培养基反复进行筛选获得细胞系，进行细胞系筛选时的培养条件为23‑25℃，光周期为16h/8h，光照强度为1000‑3000Lux，每两周继代一次；2)摇瓶规模继代培养：挑选生长状态良好，颜色鲜亮，质地紧实的固体细胞放入含有培养液的摇瓶中，培养液为含有0.4～0.6mg/L 6‑BA、0.8～1.2mg/L NAA的MS生长培养基，所述MS生长培养基的含糖量为20～40g/L，细胞接种量为30～50g/L，培养条件为23‑25℃，光周期为16h/8h，光照强度为1000‑3000Lux，摇床转速为100‑120rpm，每7‑10天继代一次；3)摇瓶转反应器继代培养：将摇瓶中细胞转接到反应器中进行继代培养，每次继代培养的培养周期为7‑10天，反应器中加入培养液，所述培养液为含有0.4～0.6mg/L 6‑BA、0.8～1.2mg/L NAA的MS培养基，所述MS生长培养基的含糖量为20～40g/L，培养条件为23‑25℃，光周期为16h/8h，光照强度为1000‑3000Lux，通气保持反应器中培养液的溶氧浓度在2‑6mg/L。
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