[发明专利]一种规模化培养天山雪莲细胞高产黄酮的调控方法

摘要

本发明提供了一种规模化培养天山雪莲细胞高产黄酮的调控方法，该技术方案首先以液体悬浮的方式对初始细胞株快速培养，每7～10天传代一次，细胞鲜重的增长量在3～5倍；而后采用两阶段培养法生长阶段使细胞快速增殖，7～10天获得最大细胞量，生产阶段在一定的高密度接种量150～400g/l(鲜重)条件下，加入前体苯丙氨酸、诱导剂冠菌素，培养3‑5天收获细胞，黄酮含量提高至13％以上。本工艺采用新型诱导剂冠菌素，用量小，作用显著，无毒副作用，能够迅速提高雪莲细胞的黄酮含量；本发明适用于20L以上的大规模生物反应器，已利用本公司的生物反应器在20L、100L、200L、1000L规模成功培养，且细胞状态良好，产量稳定，黄酮含量在11％以上。

主权项

一种规模化培养天山雪莲细胞高产黄酮的调控方法，其特征在于包括以下步骤：1)取天山雪莲细胞接种于液体生长培养基中，以温度20～25℃，每天光照14～18h、黑暗6～10h，光照强度1000～3000lux的条件培养，每7～10天传代一次，直至培养液中细胞鲜重达初始细胞接种量3～5倍；2)取步骤1)培养所得的天山雪莲细胞，以鲜重30‑80g/L的接种量接种于液体生长培养基中，以温度20～25℃，100～130rpm的转速摇床培养5～8天；从产物中取天山雪莲细胞，以鲜重150～400g/L的接种量接种于液体生产培养基中，以24h全光照，光照强度2000～3000lux，100～130rpm的转速摇床培养1～4天；3)取步骤2)培养所得的天山雪莲细胞，以鲜重50～100g/L的接种量接种于液体生长培养基中，以0.01～1m3/h的通气速率培养5～8天；从产物中取天山雪莲细胞，以鲜重150～300g/L的接种量接种于液体生产培养基中，以24h全光照，光照强度2000～3000lux，0.01～1m3/h的通气速率培养1～4天；其中所述生长培养基是含有0.4～0.6mg/L植物激素6‑BA、0.8～1.2mg/L植物激素NAA、20～40g/l蔗糖的MS培养基；所述生产培养基是含有0.4～0.6mg/L植物激素6‑BA、0.8～1.2mg/L植物激素NAA、0.1～100μmol/l苯丙氨酸、0.5～10μmol/l冠菌素、15～25g/l蔗糖的MS培养基。