[发明专利]一种捕获核酸结合蛋白的方法和试剂盒有效
申请号: | 201710080808.9 | 申请日: | 2017-02-15 |
公开(公告)号: | CN108427000B | 公开(公告)日: | 2021-06-08 |
发明(设计)人: | 张必良;米格尔·埃斯特班;鲍习琛;郭亨彭;尹梦回;王玮;克雷格·梅洛 | 申请(专利权)人: | 广州市锐博生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 万志香 |
地址: | 510663 广东省广州市广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明涉及捕获RBP的方法以及相应的试剂盒,所述方法包括将核苷类似物A加入到可合成RNA的生物样品体系中;光激活处理,使RNA与蛋白发生光交联;加入细胞裂解液,加入第一分子B;获取生物样品体系的内容物;将内容物与带有标记分子C的载体D接触;分离载体,获得RNA‑RBP复合物。本发明所述试剂盒能够更广谱地捕获RNA及其RBP,解决现有技术无法获取nonpolyA‑RBP的局限性。可高效富集RBP,且特异性好,不会捕获非RBP蛋白。 | ||
搜索关键词: | 一种 捕获 核酸 结合 蛋白 方法 试剂盒 | ||
【主权项】:
1.一种捕获RBP和/或RNA的方法,其特征在于,主要包括以下步骤:1)将带有亲偶极基团的核苷类似物加入到可合成RNA的生物样品体系中;2)光激活处理,使RNA与蛋白发生光交联;3)加入含有1,3‑二偶极基团的第一标记分子的点击反应液,通过点击反应将第一标记分子与掺有核苷类似物的RNA共价连接,使RNA被第一标记分子标记,所述点击反应为亚铜离子催化下的Huisgen三唑反应,所述点击反应液中包括有催化剂;4)加入细胞裂解液,至样品溶液澄清,所述细胞裂解液中包括有0.15M‑1M的Li盐和0.1‑1%的含锂离子的去垢剂;5)加入连接有载体的第二标记分子,第二标记分子能与第一标记分子结合反应,通过第二标记分子与第一标记分子的结合反应,将所形成的RNA‑蛋白复合物偶联至带有第二标记分子的载体上;6)分离获得载体上的RNA‑蛋白复合物;7)分离获得RNA‑蛋白复合物中的RBP和/或RNA。
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