[发明专利]一种多花黄精组织培养与快速繁殖的方法

摘要

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及多花黄精组织培养与快速繁殖的方法。本发明公开了一种多花黄精组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：（1）多花黄精茎段的消毒和接种：取当年抽出的多花黄精新茎，剪成带腋芽的中度木质化茎段进行接种；（2）丛生芽的诱导；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培养；（5）炼苗移栽。在上述步骤中采用了不同成分及配比的培养基。采用本发明的方法，能够快速地获得多花黄精植株，利于产业化生产。采用本发明方法，多花黄精丛生芽的不定芽诱导率高达91.7%，不定芽数9.5，不定芽增殖倍数可达8.6，植株移栽成活率可达95%以上。

主权项

1.一种多花黄精组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于依次包括以下步骤：（1）多花黄精花蕾的消毒于当年5月取尚未开花的多花黄精的花蕾，放入冰箱4℃低温冷藏0‑48 h，取出后加入 适量的洗洁精溶液浸泡2 min，用流水冲洗0.5‑1.0 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精 溶液中浸泡1 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温‑80，质量分数为0.1%的 HgCl2溶 液内浸泡消毒9‑10 min，然后用无菌水充分浸洗3次，得到消毒完的外植体材料；（2）丛生芽的诱导 将上一步得到的外植体材料放到无菌滤纸上，切去头尾，去除雄蕊和雌蕊，将花瓣切成 2 cm2大小，接于添加TDZ 0.5 mg/L，NAA 0.2 mg/L，AC 0.5‑1.0 mg/L的SH基本培养基中， 该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，pH为5.8‑6.0，培养基曾于121 ℃下灭菌20 min，下同；接好花瓣的培养基置先于黑暗中培养3‑5 d，培养温度为28±2℃； 随后转入光照培养，培养条件为：培养温度为(28±2)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照 强度30‑40 μmol/(m2·s)；（3）不定芽的增殖 将上一步诱导获得的不定芽丛切成2‑3个不定芽的芽块，接种到添加有TDZ 0.1 mg/L，6‑BA 2.0 mg/L，CH 0.2‑0.5 g/L，AC 0.5‑1.0 mg/L的SH基本培养基中进行培养，培养条件 为：培养温度为(28±2)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m2·s)；（4）再生植株的生根培养 切取叶片嫩绿、生长旺盛且叶片3‑4枚的不定芽，插入添加有6‑BA 0.5 mg/L，NAA 0.5 mg/L，香蕉泥 80‑100 g/L的50%浓度的SH基本培养基中生根，培养基中添加的蔗糖为 20‑30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，pH 5.8‑6.0，并曾于121℃下灭菌20 min；（5）炼苗移栽 待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注 入少量无菌水以防止培养基干裂，于6 h后半挪开瓶盖，并添加无菌水，再过18 h，移走瓶 盖，让30‑40 μmol/(m2·s)光强的灯光直照再生植株培养2 d，期间加无菌水若干次；然后 小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用流水小心将残留的琼脂冲洗干净，将植株定植于曾 消毒过的珍珠岩，菜园土重量比为 1：100‑200的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑 料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在24‑28℃之间；3 d后揭开聚乙烯塑料薄膜四角，次 日将聚乙烯塑料薄膜全部揭开，待新叶展开后即可带土移栽至大田。