[发明专利]葡萄溃疡病菌对葡萄致病力的评价方法

摘要

本发明公开了一种葡萄溃疡病菌对葡萄致病力的评价方法。该方法是：将培养在PDA平板上的菌株，打取菌饼置于改良Fries液体培养基中静置培养14天，离心收集上清，用针孔过滤器过滤排除菌丝、孢子和细菌污染，即完成粗毒素原液的制备。选择一年生绿枝条的新生幼嫩叶片，表面消毒后，打取直径为10mm的叶盘，吸取10μL粗毒素原液在叶盘中央部位接种，3天后测定病斑面积，评价葡萄溃疡病菌粗毒素原液的致病力。本发明操作简单、成本低、重复性好，为真菌毒素在葡萄溃疡病菌致病过程中作用研究与抗葡萄溃疡病葡萄品种选育研究提供了技术支撑。

主权项

葡萄溃疡病菌粗毒素原液的制备方法，包括下述步骤：1)将葡萄溃疡病菌在PDA培养基上28℃培养48小时后，用5mm打孔器沿菌落边缘打取菌饼置于盛有100mL产毒液体培养基的500mL三角瓶中，6个菌饼/100mL培养基，28℃静置培养14天；2)将步骤1)中获得的培养物倒入50mL的无菌离心管中，11400g离心8min；3)将步骤2)中上清用滤径为0.25μm的针式过滤器过滤至新的无菌离心管中，即为粗毒素原液。