[发明专利]一种定位引起酵母特殊生长表型的序列位置的方法

摘要

本发明涉及功能基因组学技术领域，公开了一种定位引起酵母特殊生长表型的序列位置的方法。本发明所述方法利用全合成酵母或半合成酵母与野生型酵母在功能基因上的序列差异，采用合成型扩增引物和野生型扩增引物，分别对特殊生长表型和正常生长表型的酵母进行PCR，根据结果分别锁定正常生长表型酵母DNA和特殊生长表型酵母DNA采用扩增引物扩增后无法扩增出条带的功能基因位置，从而快速确定两者重叠的功能基因位置即为引起酵母特殊生长表型的序列位置，避免了耗时耗力的单独菌株的基因型验证过程。

主权项

一种定位引起全合成酵母或半合成酵母特殊生长表型的序列位置的方法，其特征在于，包括：步骤1、将具有特殊生长表型的全合成酵母或半合成酵母与正常生长表型的野生型酵母交配形成二倍体酵母菌株，然后进行生孢培养使所述二倍体酵母菌株发生减数分裂，收集所有孢子，获得杂合单倍体孢子库；或合成型染色体片段替换正常生长表型的酵母野生型染色体获得的具有特殊生长表型的半合成酵母，通过收集替换过程中因同源重组产生的所有转化子，获得杂合单倍体转化子库；步骤2、根据正常生长表型和特殊生长表型设置选择性培养条件，将杂合单倍体孢子库或杂合单倍体转化子库分为正常表型库和特殊表型库；步骤3、分别提取正常表型库和特殊表型库中所有菌株的DNA，然后设计全合成酵母或半合成酵母每个功能基因的扩增引物，称为合成型扩增引物，设计野生型酵母每个功能基因的扩增引物，称为野生型扩增引物，以本步骤所述DNA为模板分别进行混合菌落PCR扩增；步骤4、记录正常生长表型的菌株库DNA采用合成型扩增引物扩增后无法扩增出条带的功能基因位置，以及特殊生长表型的菌株库DNA采用野生型扩增引物扩增后无法扩增出条带的功能基因位置，两者重叠的功能基因位置即为引起全合成酵母或半合成酵母特殊生长表型的序列位置。