[发明专利]一种肝星状细胞分离制备方法在审
| 申请号： | 201710093987.X | 申请日： | 2017-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN106947731A | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 兰天;罗维 | 申请（专利权）人： | 广州柏赛柯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人： | 郑永泉,邱奕才 |
| 地址： | 510006 广东省广州市番禺区小谷*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种肝星状细胞分离制备方法，通过灌注、剥离、密度梯度分离得到肝星状细胞，灌注过程中先后用灌注液I、灌注液II、灌注液III进行灌注；其中，所述灌注液I包括缓冲液I；所述灌注液II由每毫升缓冲液II加入0.22~0.38mg链霉蛋白酶E构成；所述灌注液III由每毫升缓冲液II加入0.52~0.68mg胶原酶D构成。本发明属于细胞分离技术领域，先后用单一酶、复合酶配合缓冲液II使细胞表面基质得到充分酶解，提高肝星状细胞得率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 星状 细胞 分离 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种肝星状细胞分离制备方法，通过灌注、剥离、密度梯度分离得到肝星状细胞，其特征在于，灌注过程中先后用灌注液I、灌注液II、灌注液III进行灌注；其中，所述灌注液I包括缓冲液I；所述灌注液II由每毫升缓冲液II加入0.22~0.38mg链霉蛋白酶E构成；所述灌注液III由每毫升缓冲液II加入0.52~0.68mg胶原酶D构成；所述缓冲液I每升包括下述重量份的各组分：NaCl 7000~9000 mg，KCl 350~450 mg，NaH2PO4·H2O 80~100 mg，Na2HPO4 100~140 mg，HEPES 2200~2600 mg，NaHCO3 300~400 mg，EGTA150~250 mg，Glucose 800~1000mg，其余为H2O；所述缓冲液II每升包括下述重量份的各组分：NaCl 7000~9000 mg，KCl 350~450 mg，NaH2PO4·H2O 80~100 mg，Na2HPO4 100~140 mg，HEPES 2200~2600 mg，NaHCO3 300~400 mg，CaCl2·2 H2O 500~620 mg，其余为H2O。
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