[发明专利]基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法

摘要

本发明涉及抗原蛋白表达技术，具体涉及基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法，通过设计重组家蚕核型多角体病毒BmNPV‑VP3‑cyHV‑polh，ORF72、ORF66、ORF81和ORF82的1‑186、993‑1197、603‑783、85‑186区域序列与家蚕质型多角体病毒结构蛋白VP3基因1‑279区域的编码序列串联融合序列由杆状病毒P10启动子控制；家蚕质型多角体蛋白基因由杆状病毒的多角体蛋白基因启动子控制。用该病毒接种家蚕或家蚕培养细胞，重组病毒表达的鲤疱疹病毒II型的抗原蛋白可包裹进家蚕质型多角体内。形成的多角体可以通过简单的差速离心实现纯化；纯化的多角体在碱性条件下裂解后，可以通过离心使多角体蛋白沉淀，而鲤疱疹病毒II型抗原留存在上清中，从而可以快速、方便地获得鲤疱疹病毒II型抗原。

主权项

一种基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法，其特征在于，包括下列步骤：（1）将家蚕质型多角体病毒多角体蛋白基因克隆进pFastBacDual质粒的EcoRI 和 XbaI之间，构建重组转移pFastBacDual‑polh质粒；（2）合成融合DNA序列；所述融合DNA序列如SEQ ID NO:3所示；（3）将步骤（2）的融合DNA序列克隆进步骤（1）的pFastBacDual‑polh质粒的XhoI和KpnI位点，获得pFast‑VP3‑cyHV‑polh质粒；（4）将步骤（3）的pFast‑VP3‑cyHV‑polh质粒转化感受态细胞，涂布于含培养基的琼脂平板上，于37℃培养，挑取白色菌落，提取重组Bacmid‑VP3‑cyHV‑polh DNA；（5）将步骤（4）的重组Bacmid‑VP3‑cyHV‑polh DNA转染家蚕培养细胞，26～27℃培养，细胞发病后，收集细胞培养上清，获重组病毒BmNPV‑ VP3‑cyHV‑polh；（6）将步骤（5）的重组病毒BmNPV‑VP3‑cyHV‑polh接种家蚕或家蚕培养细胞，发病后，收集家蚕血淋巴或家蚕培养细胞，纯化多角体，获包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体。