[发明专利]一种产2‑MIB蓝藻的探针杂交快速检测方法

摘要

本发明涉及一种产2‑MIB蓝藻的探针杂交快速检测方法。其步骤为A、待测水样中藻的总基因组DNA的提取；B、总基因组DNA进行PCR扩增；C、PCR扩增产物与特异性探针经高温变性后杂交；D、杂交产物加入纳米金与盐诱导显色反应，观察颜色变化。方法简单易行，成本低，检测时间短，无污染，仅需肉眼即可观测结果，可以快速的检测环境中产2‑MIB的蓝藻。

主权项

一种产2‑MIB蓝藻的探针杂交快速检测方法，其特征在于该方法的具体步骤为：a. 提取含藻水样中藻类的总基因组DNA，并溶于无菌双蒸水保存；b. 将步骤a所提取到的DNA进行PCR扩增反应，每50μL反应体系中含有：Premix EX Taq酶 25μL，10μmol/L的特异性扩增2‑MIB 合成相关单萜环化酶基因的正反引物各 0.5μL，待检测的DNA 1μL，双蒸水23μL ，所述的特异性扩增2‑MIB 合成相关单萜环化酶基因的正反引物为：FIP 5’‑CGCATAGGCACCCCAAGAGACGCAAGTCCAGCGCACCT‑3’；BIP 5’‑TTGGAAGTATCTAGCCGCGCG‑GGGTCGATTAGCGTCATG3’；反应程序为：94℃预变性3min，接着40个循环，每个循环94℃ 30s、58℃ 30s 和72℃ 30s，循环过后最后72℃延伸5min；c. 将步骤b所得PCR扩增产物与特异性探针经高温变性后杂交，探针序列为：F3 5’‑TGGGCCAGTACGCCAC‑3’、B3 5’‑GGAGGACGTACCCTCCAATG‑3’，杂交反应程序为：94℃ 5min，50℃ 3min；所述的PCR扩增产物与特异性探针溶液的体积比为4：1～10：1； 所述的探针溶液的浓度是10μmol/L；d. 在步骤c所得杂交反应混合物中加入纳米金溶液和盐溶液进行显色反应；所述的杂交反应混合物与纳米金溶液和盐溶液的体积比为： 1：6：3；所述的盐溶液的浓度为： 20mmol/L～50mmol/L；所述的纳米金溶液，是由柠檬酸三钠还原1%氯金酸制备而成，纳米金的粒径为13～25nm。