[发明专利]一种含有克伦特罗的猪肉粉标准物质制备方法

摘要

本发明公开了一种含有克伦特罗的猪肉粉标准物质制备方法。通过模拟饲喂，获得克伦特罗污染的猪肉原料，将样品绞碎后直接与水以适当比例混合，不经过匀浆，直接采用冷冻干燥方法获得冻干猪肉，经过研磨、筛分、混匀、辐照等步骤，制备获得具有良好均匀性的冻干猪肉粉。采用经过国际比对验证准确性的液相色谱同位素稀释质谱法(LC‑ID‑MS/MS)法进行标准物质的定值以及均匀性检验和稳定性监测。本方法制备的含有克伦特罗的冻干猪肉粉，均匀性和稳定性良好，可用于猪肉中克伦特罗残留检测的分析方法评价、分析过程的质量控制及实验室能力考核。

主权项

1.一种含有克伦特罗的猪肉粉标准物质制备方法，其特征在于，包括：克伦特罗污染的猪的喂养：体重60‑75kg的健康猪，将一天的猪饲料中混入克伦特罗，搅拌均匀，所述健康猪自由采食和饮用水，连续饲喂28‑30天，停药当天宰杀，获取克伦特罗污染的猪肌肉；样品预处理：取克伦特罗污染的猪肌肉，剔除残留肥肉、筋膜，切块；冷冻研磨至粉碎，作为原料；取原料适量，按照1:2的比例，加水稀释成肉浆，得到样品，装入冷冻盘；预冻样品：所述样品共晶点为‑20℃，设置预冻温度设为‑25℃；预冻速率为15℃/min；快速预冻3小时；第一阶段升华干燥：将所述冷冻盘装入干箱，干箱压力较长时间保持不变，以5℃/次的速率逐步提高搁板温度，直至‑5℃；当样品干层与冻干层的交界面到达盘底并消失，样品温度升至接近于搁板温度或者干箱真空度与冷阱真空度接近并保持恒定时，继续干燥1小时；第二阶段升华干燥：一次调整搁板温度至样品允许的最高温度0‑4℃以下；自动调节渗气，时间为2小时之上；样品达到最高允许温度后，恢复干箱内真空度，恒温3小时；研磨制粉：取出冻干样品；在研磨机中研碎，研磨速率为3000rpm，研磨2min；筛分：采用35目筛，超声脉冲筛分样品；混匀：样品置于10L混匀桶中，连续混匀6小时；得到猪肉粉基体标准物质，猪肉粉中克伦特罗的含量为0.68μg/kg，并且，所述猪肉粉中克伦特罗的含量是利用LC‑MS/MS进行检测的，所述检测的仪器方法：色谱柱：ACQUITY CSH C18色谱柱，100mm×3.0mm，1.7μm；美国Waters公司；流动相A为乙腈，流动相B为含0.1％甲酸的20％乙腈水溶液；梯度洗脱程序：0～5min，100％B；5～5.1min，100％B～30％B；5.1～9min，30％B；9～9.1min，30％B～100％B；9.1～16min，100％B；流速：0.2mL/min；柱温：40℃；进样体积：20μL；质谱条件：正离子扫描方式；多反应检测(MRM)；雾化气压力(GS1):50Psi；辅助气压力(GS2)：60Psi；气帘气压力(CUR)：15Psi；去簇电压(DP)：40V；碰撞室入口电压(EP)：13V；碰撞室出口电压(CXP)：14V；CAD：medium；IS：1500V；TEM:600℃。