[发明专利]一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法

摘要

一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法，(1)干燥猴头菇子实体粉碎、脱脂和烘干；(2)热水浸提和乙醇沉淀；(3)沉淀经无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，Sevag法除蛋白，透析除小分子物质得猴头菇水提水溶性多糖；(4)复溶，乙醇分级沉淀，得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分；(5)热水浸提后的滤渣，烘干；NaOH/NaBH4提取，乙醇沉淀；无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，Sevag法除蛋白，透析除小分子物质得猴头菇碱提水溶性多糖。本发明从猴头菇子实体中制备猴头菇水提水溶性和高粘性碱提水溶性多糖，利用率高；猴头菇水提水溶性多糖经乙醇分级纯化，得到不同性质的猴头菇水溶性纯化多组糖分，工艺简单、成本低。

主权项

一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法，其特征是步骤如下：（1）以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍质量的质量分数为95%~100%的乙醇浸泡24 h，4层纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇粉末备用；（2）将步骤（1）中的猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量/体积（g/mL）比为1:15~1:30，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，得到滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，得到滤液，合并两次提取所得滤液，得到滤液和滤渣分别做以下处理：A．滤液的处理：①所得滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温20~25 ℃静置12 h以上，转速4800 r/min离心15 min，收集沉淀；②在步骤①中的沉淀中依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质；脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液用相对截留分子量为3500 Da的透析袋透析，依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖；③在步骤②中的猴头菇水提水溶性精制多糖中加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15~1:30，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；④在步骤③中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；⑤在步骤④中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；⑥在步骤⑤中的上清液缓慢中加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；⑦在步骤⑥中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；⑧将步骤③、④、⑤、⑥和⑦离心分离所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可分别得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分；B．滤渣的处理：①向所得滤渣中加入0.1M~0.5MNaOH/0.01M NaBH4溶液，重量/体积（g/mL）比为1:10~1:30，4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温20~25 ℃静置12 h以上，4800 r/min离心15 min，收集沉淀；②在步骤①中的沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质；脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液用相对截留分子量为3500 Da的透析袋透析，依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇碱提水溶性精制多糖。