[发明专利]一种植物茎秆中木质素单体的测定方法

摘要

本发明提供了一种植物茎秆中木质素单体的测定方法，属于生物技术领域。该方法包括以下步骤先将样品烘干后进行预处理，然后用BF3，EtSH，二氧六环提取，再加入内标二十四烷，最后用吡啶和N,O‑双三甲基硅基乙酰胺衍生化，用气相色谱‑质谱联用仪分析。然后根据分子离子峰来定性，其中质荷比239为H木质素单体，质荷比269为G木质素单体,质荷比299为S木质素单体，根据内标二十四烷的浓度、内标峰面积，样品浓度、样品峰面积，从而计算出样品中三种木质素单体的含量。本发明提供的详细的处理方法，可以准确的测定植物茎秆中H、G、S木质素单体的含量，从而为深入研究植物茎秆中H、G、S木质素单体形成机理提供理论依据。

主权项

一种植物茎秆中木质素单体的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)植物茎秆收获后在65‑70℃的烘箱中完全烘干，用小型粉碎机粉碎后过60‑80目筛；2)取0.07‑0.10g样品置于5mL离心管中，加1.5‑2.0mL80％乙醇，充分涡旋5‑10min，10,000‑12,000rpm离心8‑10min，倒掉上清液，此步骤重复3次；3)加入1.5‑2.0mL氯仿/甲醇为2:1的混合液，充分涡旋3‑5min，10,000‑12,000rpm离心8‑10min，倒掉上清液；4)加入500‑600mL丙酮，在30‑35℃的氮吹仪上吹干；5)加入1.5‑2.0mLpH5.0的0.1mol/L的醋酸钠缓冲液，盖上盖子后，置于80‑85℃的水浴锅中热击30‑40min；6)置于‑4‑0℃的冰浴中冷却5‑10min；7)加入35‑40μL0.01％NaN3，35‑40μL淀粉酶，3‑4μL支链淀粉酶，盖上盖子充分涡旋3‑5min后，置于37℃的摇床上12‑16h；8)100℃热击10min,终止消化，10,000‑12,000rpm离心8‑10min，倒掉上清液；9)加入500‑600mL丙酮，在30‑35℃的氮吹仪上吹干备用；10)称取上述吹干备用的样品5‑8mg，置于密封性好的玻璃管中，加入1mL2.5％BF3,10％EtSH，87.5％二氧六环混合液，轻轻摇晃，给玻璃管中充满氮气置换掉管中全部的空气后立马盖上盖子；11)在100℃条件下加热4h，每隔1h轻轻摇晃1次；12)置于冰上冷却5‑8min，终止反应；13)加入0.4mol/L NaHCO30.3‑0.4mL调节上层液相的pH为3‑4；14)加入2mL超纯水、0.2mL二十四烷及0.8mL乙酸乙酯，静置10‑15min；15)快速吸取上层的有机相300‑400μL转移至新的离心管中，确保没有带入水；16)置于30‑35℃的氮吹仪上吹干，将吹干的物质重新溶于200‑300μL丙酮中；17)置于30‑35℃的氮吹仪上吹干，将吹干的物质重新溶于400‑500μL乙酸乙酯中，用0.22μm有机滤膜过滤；18)吸取过滤后的溶液100‑200μL，向里面加入20‑40μL吡啶，100‑200μLN,O‑双三甲基硅基乙酰胺，在25‑30℃室温下静置2‑3h后，取2‑3μL进行气相色谱‑质谱联用仪分析；19)根据分子离子峰来定性，其中质荷比239为H木质素单体，质荷比269为G木质素单体,质荷比299为S木质素单体，根据内标二十四烷的浓度、内标峰面积，样品浓度、样品峰面积，从而计算出样品中三种木质素单体的含量。