[发明专利]一种遗传性耳聋基因检测试剂盒

摘要

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种遗传性耳聋基因检测的核酸膜条及试剂盒。所述遗传性耳聋基因检测试剂盒包括PCR反应液，所述PCR反应液包括PCR反应液A、PCR反应液B、PCR反应液C、PCR反应液D和PCR反应液E；所述PCR反应液包括对应的引物和探针。本发明试剂盒利用文献报道的各种突变位点的序列设计特异扩增的LATE‑PCR专用引物，采用锁核酸修饰的ZNATM探针，使最少管的反应液检测最多的位点。本发明试剂盒中的PCR反应液A、B、C、D、E可使用同一扩增程序在同一台荧光PCR仪上进行测试，满足临床快速、方便检测耳聋的需求。

主权项

一种遗传性耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括PCR反应液A、PCR反应液B、PCR反应液C、PCR反应液D和PCR反应液E；所述PCR反应液A包括如下引物和探针：引物G2F1：5'‑TAGTGATTCCTGTGTTGTGTG‑3'；引物G2R1：5'‑AGCCTTCGATGCGGACCTTCTG‑3'；内参引物GF1：5'‑CTATGACTTAGTTGCGTTAC‑3'；内参引物GR1：5'‑GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG‑3'；探针P1：5'‑GTTTGTTCACACCCCCCAGGA‑Z4‑BHQ1探针P2：5'‑CAGCCACAATGAGGATC‑3'；探针P3：5'‑TGCAGACAAAGTCGGCCT‑3'；探针P4：5'‑TAGCACACGTTCTTGCAGCCTGGCTGCAG‑3'；探针P5：5'‑CAGCTGCAGGGCCCATAG‑3'；探针P6：5'‑CTTCTCGTCTCCGGTAGGC‑Z4‑3'；探针P25：5'‑CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC‑3'；所述PCR反应液B包括如下引物和探针：引物G2F2：5'‑GACCTACACAAGCAGCATC‑3'；引物G2R2：5'‑TTCAGCAGGATGCAAATTCCAGACAC‑3'；引物G3F1：5'‑AGTTCCTCTTCCTCTACCTG‑3'；引物G3R1：5'‑CACAGATGGTGAGTACGATGCAGACG‑3'；引物SF1：5'‑AAATACCGAGTCAAGGAATG‑3'；引物SR1：5'‑GCCTTGAAGGGTAAGCAACCATCTGTC‑3'；引物SF2：5'‑GAACACTTTCTCGTATCCAGCAGC‑3'；引物SR2：5'‑TCCATCTATATTTTACTTGTAAGTTC‑3'；引物SF3：5'‑CACAGCTAAAGATTGTCCTC‑3'；引物SR3：5'‑CCATCCCTGGAGCAAGAAGCAACAC‑3'；内参引物GF1：5'‑CTATGACTTAGTTGCGTTAC‑3'；内参引物GR1：5'‑GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG‑3'；探针P7：5'‑AGGCGTTCGTTGCACTTCACCA‑3'；探针P8：5'‑CTTCTTGGTAGGTCGGGCAAT‑3'；探针P9：5'‑TAGCCCAATACTAACTCCCG‑3'；探针P10：5'‑CCTGACTCTGCTGGTTGGAAT‑Z4‑3'；探针P11：5'‑GATAATAGGGAGAACTCCATTGT‑3'；探针P25：5'‑CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC‑3'；所述PCR反应液C包括如下引物和探针：引物SF4：5'‑CTGGATTGCTCACCATTGTCGTCTG‑3'；引物SR4：5'‑GTACTAAGAGGAACACCACAC‑3'；引物SF5：5'‑TCATCCAGTCTCTTCCTTAG‑3'；引物SR5：5'‑AGCCTTCCTCTGTTGCCATTCCTC‑3'；引物SF6：5'‑GAGCAATGCGGGTTCTTTGACGAC‑3'；引物SR6：5'‑TCTTGAGATTTCACTTGGTTC‑3'；内参引物GF1：5'‑CTATGACTTAGTTGCGTTAC‑3'；内参引物GR1：5'‑GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG‑3'；探针P12：5'‑TTTGTTTTATTTCAGACGAT‑3'；探针P13：5'‑CCTGAGAAGATGTTGCTGAT‑3'；探针P14：5'‑GCCGTGCGGGAAAGAGCAGTG‑3'；探针P15：5'‑TTTGATGGTCCATGATGC‑Z4‑3'；探针P25：5'‑CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC‑3'；所述PCR反应液D包括如下引物和探针：引物SF7：5'‑AGATTCTTAGATTTTCCAGTCC‑3'；引物SR7：5'‑AGAGGGTCTAGGGCCTATTCCTGATTG‑3'；引物SF8：5'‑GTGAACGTTCCCAAAGTGCCAATCC‑3'；引物SR8：5'‑ATACTGGACAACCCACATC‑3'；引物MF1：5'‑CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC‑3'；引物MR1：5'‑TGTTAAGCTACACTCTGGTTC‑3'；内参引物GF1：5'‑CTATGACTTAGTTGCGTTAC‑3'；内参引物GR1：5'‑GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG‑3'；探针P16：5'‑ATAAAATACTTACTGTGGACTT‑3'；探针P17：5'‑TCCATAGCCTTCTGCTTGACTGTG‑Z4‑3'；探针P18：5'‑GAGATCACAGCGGGTGGTAAG‑3'；探针P19：5'‑ATCACCCCCTCCCCAATA‑3'；探针P20：5'‑CCACTATGCTTAGCCCTA‑3'；探针P25：5'‑CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC‑3'；所述PCR反应液E包括如下引物和探针：引物MF1：5'‑CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC‑3'；引物MR1：5'‑TGTTAAGCTACACTCTGGTTC‑3'；引物MF2：5'‑AGGCTCATTCATTTCTCTAAC‑3'；引物MR2：5'‑CATGGGGTTGGCTTGAAACCAGC‑3'；引物MF3：5'‑CCACAACACAATGGGGCTCACTCAC‑3'；引物MR3：5'‑AGGGTGGTTATAGTAGTGTG‑3'；内参引物GF1：5'‑CTATGACTTAGTTGCGTTAC‑3'；内参引物GR1：5'‑GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG‑3'；探针P21：5'‑ACCGCCCGTCACCCTCCTCAA‑3'；探针P22：5'‑TAGAGGAGACAAGTCGTAACAT‑3'；探针P23：5'‑TTTGCCTAGATTTTATGTATACG‑3'；探针P24：5'‑CGACCCCTTATTTACCGA‑Z4‑3'；探针P25：5'‑CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC‑3'；其中，探针序列中包含Z4的探针代表此探针为ZNATM探针，碱基下方设有下划线的为锁核酸修饰的碱基。