[发明专利]一种DNA片段与载体的高效连接方法及其应用与试剂盒在审
| 申请号： | 201710130039.9 | 申请日： | 2017-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN106834321A | 公开（公告）日： | 2017-06-13 |
| 发明（设计）人： | 尹建河;栗风鹏;孙付森;李慧;陈维之;孙中平;廖国娟 | 申请（专利权）人： | 苏州金唯智生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种DNA分子片段与载体的高效连接方法，包括如下步骤（1）酶切连接反应将载体与DNA分子片段混合，加入缓冲液、限制性核酸内切酶和DNA连接酶，进行酶切、连接反应；（2）酶切去磷酸化反应待反应结束后，在体系中加入限制性核酸内切酶和碱性磷酸酶，并补加缓冲液，进行酶切和去磷酸化反应。本发明的方法，载体不需要提前线性化制备，并且可实现边酶切边连接。同时，本发明的反应产物转化后培养皿上只长白斑，且阳性克隆率明显提高，便于后续的菌落挑选培养和菌液PCR鉴定，减少大规模基因合成中挑选菌落和菌液PCR鉴定的工作量，降低基因合成克隆的成本，特别适合于目的基因的大样本测序分析。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 dna 片段 载体 高效 连接 方法 及其 应用 试剂盒 | ||
【主权项】：
一种DNA片段与载体的高效连接方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将载体与DNA分子片段混合，加入缓冲液、限制性核酸内切酶和DNA连接酶，进行酶切、连接反应；（2）待反应结束后，在体系中加入限制性核酸内切酶和碱性磷酸酶，并补加缓冲液，进行酶切和去磷酸化反应。
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