[发明专利]鸡传染性法氏囊和禽腺病毒4型二联灭活疫苗的制备方法在审
| 申请号： | 201710134514.X | 申请日： | 2017-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN106822886A | 公开（公告）日： | 2017-06-13 |
| 发明（设计）人： | 张毓金;谢秉超;严悌昆 | 申请（专利权）人： | 广州博恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/12 | 分类号： | A61K39/12;A61K39/235;A61K9/107;A61P31/14;A61P31/20;C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京精金石专利代理事务所(普通合伙)11470 | 代理人： | 刘晔 |
| 地址： | 510530 广东省广州市萝*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用LMH细胞系生产鸡传染性法氏囊和禽腺病毒4型二联灭活疫苗的方法，其包括以下步骤分别将鸡传染性法氏囊和禽腺病毒4型病毒接种于LMH细胞，经培养、冻融、离心、浓缩等步骤得到鸡传染性法氏囊制苗病毒液和禽腺病毒4型制苗病毒液，然后将两种病毒的制苗病毒液进行灭活后，等体积混合，乳化制成乳剂型灭活疫苗。本发明提供的二联疫苗效价高，对鸡传染性法氏囊病毒和禽腺病毒4型病毒具有完全的免疫保护作用，安全性良好，稳定有效，保护期长。 | ||
| 搜索关键词： | 传染性 法氏囊 病毒 二联 疫苗 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种用LMH细胞系生产鸡传染性法氏囊和禽腺病毒4型二联灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)传代细胞系LMH细胞的制备：将LMH细胞用胰酶‑EDTA消化液进行消化分散传代，加入DMEM培养液在37℃、5％CO2培养箱中培养，直至形成生长良好的细胞单层，再用无血清DMEM培养液清洗细胞3次，用于鸡传染性法氏囊病毒和禽腺病毒4型病毒接种；(2)种毒繁殖：分别将鸡传染性法氏囊病毒和禽腺病毒4型病毒毒种按终体积为1:50～1:500接种到步骤(1)制备的单层细胞，并在37℃吸附30～60分钟后吸弃病毒液，加入细胞维持液于37℃、5％CO2单独培养58±2小时，直至细胞病变CPE达80％以上，分别收获鸡传染性法氏囊细胞病毒液和禽腺病毒4型细胞病毒液；(3)病毒收集、浓缩和纯化：分别将收获的鸡传染性法氏囊细胞病毒液和禽腺病毒4型细胞病毒液置于‑20℃反复冻融两次，5000rpm，4℃离心10min后收集上清液，然后分别使用50K中空纤维柱进行浓缩，即为鸡传染性法氏囊制苗病毒液和禽腺病毒4型制苗病毒液；(4)将上述两种病毒的制苗病毒液进行灭活后，等体积混合，乳化制成乳剂型灭活疫苗。
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