[发明专利]一种贝酵母转FZF1基因耐硫转化子的制备及鉴定方法

摘要

一种贝酵母转FZF1基因耐硫转化子的制备及鉴定方法，属于培育酵母菌株及鉴定方法。本发明包括：构建FZF1基因表达载体；贝酵母转基因；PCR筛选转化子；贝酵母菌株耐硫性测定；RT‑PCR检测；转化子生长曲线测定；转录组分析等。试验表明转化子A9‑FZF1‑1和A9‑FZF1‑2能在含40 mM亚硫酸钠的培养基中生长，同时本发明提供了鉴定增强FZF1基因表达的贝酵母新菌株硫代谢网络的相关基因表达量的方法。

主权项

制备贝酵母转FZF1基因耐硫转化子的方法，包括贝酵母FZF1基因重组DNA载体构建和复制，以及克隆的贝酵母耐硫转化子的培养，其特征是：（1）以耐硫贝酵母A9的FZF1‑1序列和ACY338的FZF1‑2序列作为外源基因，用BamH I和Sal I酶切，合成并构建入pGEM–T Easy载体中，构建贝酵母FZF1基因重组DNA载体；（2）以重组DNA载体为模板，用Bam H I和Sal I对PCR产物进行酶切，引物为：FZF1‑1‑L：GCA GGA TCC ATG GCC AAT ACA AAG AAA CCT，FZF1‑1‑R ：CAG GTC GAC TTA GTA TTC AAA TAA GCT CCT；FZF1‑2‑L： 5′‑GCA GGA TCC ATG GCA AAT AAA AAG AAA CTG，FZF1‑2‑R：5′‑CAG GTC GAC TTA GTA TTC GAA TAA GCT CCT；引物下划线部分分别是酶切位点，其产物与同样经Bam H I和Sal I双酶切的表达载体PYIP5连接，构建重组质粒PYIP5‑FZF1‑1和PYIP5‑FZF1‑2，导入受体细胞克隆。