[发明专利]一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法

摘要

本发明公开了一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，采用灵敏的荧光分光光度计直接测定胱氨酸片含量。实验表明，胱氨酸分子在碱性的溶液环境中会呈现特定的荧光性质，利用胱氨酸的含量与荧光强度在一定条件下呈良好的线性关系，可直接测定胱氨酸的含量；本发明精密度高，准确度好；反应条件温和，所用仪器成本较低；无需复杂前处理过程，操作过程简单，省时省力；所用溶剂简单易得，对操作人员伤害小，污染少。

主权项

一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一：胱氨酸标准溶液的配制，用电子天平称取1.2015g的L‑胱氨酸，用适量的氢氧化钠溶解，调节pH，并用蒸馏水定容至50mL的容量瓶中，配制成0.1mol∕L的溶液，之后可以根据需要将储备液进行稀释，临用配制作为操作液；步骤二：称取0.6057g的三羟甲基氨基甲烷（Tris），用蒸馏水溶解并定容至50mL的容量瓶中，配制成0.1mol/L的溶液；将50mL0.1mol/L Tris溶液与7.0mL0.1mol/L的盐酸混匀并稀释至100mL，配制成0.05mol/L的Tris‑HCl缓冲溶液；步骤三：荧光光谱的实验，准确移取1mL 0.1 mol/L胱氨酸标准溶液至10mL比色管中，加Tris‑HCl缓冲溶液，再加蒸馏水定容L，摇匀，室温静置15 min；在水浴加热后，于Cary Eclipse 和F‑7000荧光分光光度计上测量；设置各项荧光光谱测量参数如下：激发波长：410 nm；狭缝比5.0nm/5.0nm；发射光谱波长范围：415～700 nm；扫描速度：中速； 将反应后胱氨酸溶液在FLS920荧光光谱仪上测定其荧光量子产率，在FS5荧光光谱仪上测定荧光寿命；步骤四：胱氨酸片样品的荧光光谱测定；准确移取市售胱氨酸片10片，用研钵研细，用电子天平准确称取0.1g，加到10mL洁净干燥的比色管中，加少量碱溶后加水定容超声溶解后，过滤；取1mL于10mL洁净干燥的比色管中，加的Tris‑HCl缓冲溶液，再加蒸馏水定容，摇匀，室温静置15 min；水浴加热后，制成溶液；于荧光分光光度计上，设置狭缝5.0nm/5.0nm，最佳激发波长Ex=410nm，在415～700nm扫描范围内进行荧光光谱分析；同时用二次水进行空白实验。