[发明专利]同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器及其方法体系

摘要

本发明公开了一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器及其方法体系。从内到外依次为电极、信标探针层、6‑巯基己‑1‑醇(MCH)封闭层、均相反应产物层，信标探针层采用电化学信号互不影响的亚甲基兰和二茂铁修饰；制备方法是先对电极抛光并用H₂SO₄和H₂O₂处理，再将信标探针修饰于电极表面。本发明传感器制备方法简单，性能稳定，电极的重复性好，适用于食品安全中水胺硫磷和啶虫脒的检测和生物传感器产业化的实际应用；可实现对食品中水胺硫磷和啶虫脒的快速在线检测，水胺硫磷和啶虫脒检出限分别是0.12和0.37ppb。

主权项

1.一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器的方法，其特征在于包括：(1)电极抛光并用体积比为3:1的H₂SO₄和H₂O₂处理；(2)将含有信标探针XB1和信标探针XB2的两种信标探针溶液修饰于电极表面；(3)修饰MCH封闭未特异性结合的位点；(4)将均相反应产物修饰于电极表面上修饰后的信标探针；(5)用磁力搅拌器在PBS溶液中清洗修饰后的电极；(6)采用三电极体系，读取电极上的电信号变化，根据电极表面产生的电流大小获得水胺硫磷和啶虫脒的检测结果；所述方法步骤(1)～(4)具体为：(1)电极抛光后，将电极浸泡在体积比为3:1的H₂SO₄和H₂O₂的混合液中，孵育20min后用超纯水彻底洗涤；(2)将2μL的浓度为10μM的信标探针XB1溶液和4μL的浓度为10μM的信标探针XB2溶液滴加到电极表面；(3)修饰MCH封闭未特异性结合的位点；(4)采用以下方式制备均相反应产物，再修饰于电极表面上修饰后的信标探针：(4.1)将2μL的浓度为100nM的发卡HAP1溶液和2μL的浓度为100nM的发卡HAP2溶液加入到20μL的Phi29 DNA聚合酶的缓冲溶液中；(4.2)加入两种待测目标物水胺硫磷和啶虫脒溶液，在37℃下孵育30min；(4.3)加入2μL的浓度为100nM的引物1溶液和2μL的浓度为100nM的引物2溶液，并加入1μL的浓度为10unit μL^‑1的Phi29 DNA聚合酶、2μL的浓度为5mM的dNTP和1μL的浓度为10unit μL^‑1的NB.BbvCI，在37℃孵育1h；所述的XB1如SEQ ID NO.1，所述的XB2如SEQ ID NO.2；所述的发卡HAP溶液中两种基因序列分别为发卡HAP1和发卡HAP2，发卡HAP1如SEQ ID NO.3，发卡HAP2如SEQ ID NO.4，两种基因序列的含量相同。