[发明专利]EGFR基因检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，提供了一种EGFR基因检测试剂盒及检测方法。本试剂盒针对EGFR 18号外显子、19号外显子、20号外显子、21号外显子区域的特定位点，设计了特异性的扩增引物序列，使得对待测位点的检测假阳性率低，灵敏度高，能够检测出突变比例为5%以上的基因突变；在含待测位点的EGFR核酸片段两端分别F接头和R接头获得文库分子，F接头和R接头上均含有扩增引物结合位点，当对多个含待测位点的EGFR基因片段进行测序时，统一了对文库分子进行扩增的扩增引物，保证了扩增效率的一致性，降低了引物设计难度；R接头设计为发夹结构，能够对扩增产物的末端进行封闭，从而有效避免F接头连接在R接头上，提高了连接效率。

主权项

一种EGFR基因检测试剂盒，包括用于对多个EGFR基因待测位点中的至少一个进行特异性扩增的引物组，其特征在于，所述多个EGFR基因待测位点包括rs28929495、rs121913428、rs121913421、rs397509368、rs121913442、rs121913438、rs397517098、rs727504339、rs121913435、rs121913440、rs121913436、rs727504258、rs727504233、rs121913422、rs727503016、rs727503015、rs727504332、rs121913465、rs121434569、rs121434568；用于特异性扩增含rs28929495和/或rs121913428位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:2中的至少一对；用于特异性扩增含rs121913421、rs397509368、rs121913442、rs121913438、rs397517098、rs727504339、rs121913435、rs121913440、rs121913436、rs727504258、rs727504233、rs121913422、rs727503016、rs727503015、rs727504332中至少一个位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:6中的至少一对；用于特异性扩增含rs121913465位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:10中的至少一对；用于特异性扩增含rs121434569位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:10中的至少一对；用于特异性扩增含rs121434568位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:16中的至少一对。