[发明专利]一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法及应用在审
| 申请号： | 201710158115.7 | 申请日： | 2017-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN106867999A | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 马金平;王娟 | 申请（专利权）人： | 新疆肥力沃生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 835612 新疆维吾尔自*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 本发明属于农业生物有机肥料领域，特别涉及一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法及应用。本发明还涉及检测微生物发酵有机肥的方法，所述方法包括使用通过以上方法获得的总DNA的步骤。本发明的方法简单方便，产量、得率和浓度及纯度高且价格便宜。发明所得的DNA片段较完整、大小约为1500bp，浓度、纯度、得率高，所得DNA可直接作为PCR扩增的模板，以及生物发酵有机肥微生态学等方面的研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 简单 快速 提取 微生物 发酵 有机肥 dna 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法，其特征在于，包括如下进行的步骤：(1)预处理取微生物发酵有机肥样品，加入PBS缓冲液、浸泡、离心、收集沉淀，重复上述的操作步骤，至离心后上清液无色，弃上清液，收集沉淀物，记为沉淀物Ⅰ；(2)提取在沉淀物Ⅰ中加入蒸馏水，重悬并离心，取上清液，然后向上清液中加入枯草杆菌蛋白酶和SDS溶液的混合液振荡混匀，于45‑60℃水浴9‑60分钟，离心，弃上清液，记为上清液Ⅰ，收集沉淀物；然后在收集的沉淀物中加裂解液和SDS溶液的混合液，并在温度低于25℃下使DNA复性，再次离心，取上清液，记为上清液Ⅱ，所述上清液Ⅱ中含有总DNA。
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