[发明专利]核酸的等位基因特异性扩增

摘要

本发明包括等位基因特异性扩增的方法，利用等位基因特异性寡核苷酸，其与靶序列的超过一个变体至少部分互补，具有与靶序列的仅一个变体互补的内部放置的选择性核苷酸，其中当等位基因特异性寡核苷酸与它对于其具有所述互补选择性核苷酸的靶序列变体杂交时，所述等位基因特异性寡核苷酸通过核酸聚合酶占优势地或唯一地延伸。

主权项

一种靶序列变体的等位基因特异性扩增的方法，其中所述扩增涉及聚合酶链反应（PCR），所述靶序列以几个变体序列的形式存在，所述方法包括（a）使第一种和第二种寡核苷酸与靶序列杂交；其中第一种寡核苷酸与靶序列至少部分互补，并且第二种寡核苷酸在其3'‑部分和5'‑部分与靶序列至少部分互补，并且具有与靶序列的仅一个变体互补的至少一个选择性核苷酸，其中所述选择性核苷酸在接近所述第二种寡核苷酸3'末端的1 – 5个核苷酸之间的位置上，且其中所述第二种寡核苷酸包含具有在环外氨基上共价修饰的碱基的至少一个核苷酸，其中所述环外氨基是在腺苷的6‑位置、鸟苷的2‑位置或胞苷的4‑位置中的氨基；（b）为所述第一种和第二种寡核苷酸与靶序列的至少一个变体杂交提供适合于通过核酸聚合酶的寡核苷酸延伸的条件，其中在所述第二种寡核苷酸与互补于所述选择性核苷酸的靶序列的所述变体杂交时，所述聚合酶能够优先延伸所述第二种寡核苷酸，并且在所述第二种寡核苷酸与不互补于所述选择性核苷酸的靶序列的所述变体杂交时，基本上更少；和（c）重复杂交和延伸步骤顺序多次。