[发明专利]一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法

摘要

本发明提供一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法，通过使用单一变量法调整测试增强光源的波长对甘草组织培养苗的生理影响，确定最适增强光源波长，并根据不同波长光源对甘草组培苗的影响，确定不同波长光源出组合，并通过保持增强光源不变方向确定基础培养基，同时引入组培苗的生长量作为筛选标准，更加适合商业工厂化生产。

主权项

一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加增强光源种类并确定光源波长的初步筛选范围；步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草子叶作为外植体，对外植体进行同一的消毒灭菌处理；步骤S30对照培养，以MS培养基为基础培养基，添加6‑BA (6‑苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4‑D（2,4‑二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草子叶，并进行常规诱导组织培养作为对照组，在常规培养的基础上条件不同波段增强增强光源作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个实验组和对照组的诱导出愈伤组织的数量和褐化的数量，并计算诱导率和褐化率；步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的增强光源波长；步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的增强光源波长范围重复进行步骤S10‑S60缩小筛选范围或者确定最适波长范围；步骤S80方向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适波长范围搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基；步骤S90不同波长组合筛选，通过单一因数确定不同波长对甘草子叶诱导的生理参数影响，调整最适合波长组合。