[发明专利]一种血清型的大肠杆菌的培养方法

摘要

本发明属于医学技术领域，公开了一种血清型的大肠杆菌的培养方法，包括以下步骤原料采集将屠宰后的鸡立即结扎胆管；肠杆菌筛选、毒素测验、胆汁存活筛选、高浓度胆汁耐受筛选、分离提纯；重复大肠杆菌筛选、毒素测验、胆汁存活筛选步骤，得到血清型的大肠杆菌。本发明解决了现有牛黄不能更高效的产生β‑G酶、牛黄形成过程中对牛本身的生长影响相对较大、在胆囊环境的生长周期较短，繁殖活力较弱的问题。

主权项

一种血清型的大肠杆菌的培养方法，其特征在于，所述血清型的大肠杆菌的培养方法，包括以下步骤：原料采集：将屠宰后的鸡立即结扎胆管；大肠杆菌筛选：无菌采集各胆内胆汁接种于麦康凯琼脂平板，同时另取胆内胆汁接种于普通肉汤增菌，经扩大培养后，挑选生长良好的菌落使用甘油保存；毒素测验：以保存的大肠杆菌标株o8为阳性对照，用胆囊分离出大肠杆菌分别接种于葡萄糖、蛋白胨肉汤；增菌，培养后作兔肠结扎试验，判定结果；再进行小鼠的中长期注射毒性检测，筛选出对小鼠生长影响小的菌种；胆汁存活筛选：取毒素测验步骤中分离菌种的肉汤培养物接种于牛胆汁中，培养，取存活菌落使用甘油条件下保存；高浓度胆汁耐受筛选：用肉汤配制含牛胆汁的无菌培养基；使用胆盐配成无菌肉汤；取胆汁存活筛选步骤中分离菌的肉汤培养物和接种于胆盐牛胆汁琼脂中由低度胆汁到高度逐步培养驯化；重复胆汁存活筛选步骤；将驯化得到的菌株分别进行牛胆囊动态生长模拟环境：取分离菌种的肉汤培养物分别接种于灭菌的牛胆汁中，上调和下调胆汁中的胆红素浓度；培养；取培养后的菌种涂布于麦糠凯琼脂平板培养；检测生长好的菌落对葡萄糖醛酸的利用情况进行再次筛选；分离提纯：重复大肠杆菌筛选、毒素测验、胆汁存活筛选步骤，得到血清型的大肠杆菌。