[发明专利]一种马立克氏病毒的悬浮培养方法在审
| 申请号： | 201710179331.X | 申请日： | 2017-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN107058243A | 公开（公告）日： | 2017-08-18 |
| 发明（设计）人： | 温良海;李延鹏;陈瑞爱;赵兵;罗琼 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学;肇庆大华农生物药品有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)44288 | 代理人： | 赵赛,袁嘉恩 |
| 地址： | 513042*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，包括步骤1)鸡胚源DF‑1细胞系的传代与培养；2)细胞毒种的繁殖用稀释液将马立克氏病毒种稀释，将病毒和DF‑1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中培养，收获病毒作为毒种；3)制苗用病毒的吸附培养将毒种稀释为病毒液，和新的鸡胚源DF‑1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中，进行悬浮吸附培养；4)病毒的增殖培养及收获弃去悬浮培养液，加入病毒增殖培养液进行悬浮增殖培养；当接入的细胞病变率达80％以上时，收获病毒液并保存；该方法用微载体结合悬浮的方式对马立克氏病毒进行培养，克服了传统疫苗生产受制于鸡胚的供应的缺点，避免了感染外源病毒的风险。 | ||
| 搜索关键词： | 种马 立克氏 病毒 悬浮 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)鸡胚源DF‑1细胞系的传代与培养：以鸡胚源DF‑1细胞系作为制备病毒用细胞；将鸡胚源DF‑1细胞经胰酶‑EDTA细胞分散液消化成单个均匀细胞，然后置于细胞生长液继续培养，当细胞长成单层时，用于继续传代或接种病毒；2)细胞毒种的繁殖：用稀释液将马立克氏病毒种稀释，将病毒和经步骤1)处理的DF‑1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中进行培养，当细胞病变时收获细胞毒作为毒种；3)制苗用病毒的吸附培养：将从步骤2)得到的毒种稀释为病毒液，将病毒和新的鸡胚源DF‑1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中，进行悬浮吸附培养；4)病毒的增殖培养及收获：弃去悬浮培养液，加入病毒增殖培养液进行悬浮增殖培养；当接入的细胞病变率达80％以上时，收获病毒液并保存。
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