[发明专利]一种贵港报春苣苔的组织培养方法有效
申请号: | 201710183857.5 | 申请日: | 2017-03-24 |
公开(公告)号: | CN107047302B | 公开(公告)日: | 2019-04-05 |
发明(设计)人: | 闫海霞;何荆洲;黄昌艳;卜朝阳;邓杰玲;关世凯;陶大燕 | 申请(专利权)人: | 广西壮族自治区农业科学院花卉研究所 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 11279 | 代理人: | 朱志宽 |
地址: | 530007 广西壮族*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | 本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种贵港报春苣苔的组织培养方法。一种贵港报春苣苔的组织培养方法,包括如下步骤:外植体的消毒灭菌、初代培养、不定芽的增殖培养、愈伤组织分化、壮苗培养和生根培养。本发明的贵港报春苣苔的组织培养方法具有后代长势良好,繁殖速度快、繁殖系数大,繁殖后代整齐一致和生根率高的优点。 | ||
搜索关键词: | 一种 贵港 报春苣苔 组织培养 方法 | ||
【主权项】:
1.一种贵港报春苣苔的组织培养方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)外植体的消毒灭菌:于春季取贵港报春苣苔带叶柄的幼嫩叶片,先用洗衣粉浸泡10‑15min后在流水下冲洗干净10‑15min,并用软毛刷轻轻刷洗叶片;在超净工作台上先用棉球蘸取70%酒精拭擦叶片表面,无菌蒸馏水冲洗3‑5次,将叶片在75%酒精中浸泡10‑12s,无菌蒸馏水冲洗3‑5次,再用0.1%升汞溶液处理8‑10min,无菌蒸馏水冲洗3‑5次;灭菌过程中轻轻震荡使酒精或升汞充分接触叶片;所述的0.1%升汞溶液中加入有吐温‑20,每100mL0.1%升汞溶液中加入2滴吐温‑20;(2)初代诱导:将消毒灭菌好的叶片切下叶柄,余下的叶片按照以下方法切割:横切、纵切,切下的叶片要求四周切去少许组织,保证四周均有切口;然后将叶柄接入初代培养基中培养25‑30d,得到愈伤组织;将横切叶片和纵切叶片接入初代培养基中培养24‑30d,诱导出不定芽和愈伤组织;要求叶柄、叶片的正面朝上,叶背朝下,使叶背接触培养基;(3)增殖培养:将从叶片直接获得的具有1对以上叶片的不定芽接入增殖培养基中培养28‑35d;(4)愈伤组织分化:将从叶片或叶柄诱导出来的愈伤组织切成1cm×1cm大小,然后接入分化培养基中培养30‑32d;(5)壮苗培养:当组培苗具有2对以上叶片时,转接于壮苗培养基中培养15‑18d;(6)生根培养:选取生长健壮,具有2对以上叶片的植株,转接于生根培养基中培养25‑28d;步骤(2)中用于叶柄的愈伤组织诱导培养基为:MS+6‑BA3‑5mg/L+2,4‑D0.5‑1.0mg/L。
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