[发明专利]一种犬血浆中右旋雷贝及其代谢产物的浓度检测方法

摘要

本发明提供了一种测定犬血浆中右旋雷贝及其代谢产物浓度的方法。以地西泮为内标，采用蛋白沉淀法预处理血浆样本后，经液相色谱‑串联质谱系统谱柱分离检测，内标法计算得到犬血浆中右旋雷贝及其代谢产物浓度，本发明具有线性范围广、灵敏度高、操作简便、准确快速等特点，可用于药代动力学及毒代动力学研究中右旋雷贝及其代谢产物在犬血浆中浓度的测定。

主权项

一种血浆中右旋雷贝拉唑及其代谢产物的浓度检测方法，包括步骤(1)样品制备，(2)采用液相‑质谱联用检测，(3)标准曲线制备，(4)犬血浆中右旋雷贝拉唑及其代谢产物测定；所述步骤(1)样品制备的步骤包括：取待测血浆样本25μL，加内标工作溶液25μL，加200μL乙酸乙酯，斡旋混合，离心5min(12000r/min，4℃)，取有机相180μL，氮气吹干，残留物加入50μL10mmol/L乙酸铵溶液‑乙腈(1:1)复溶，斡旋，离心5min(12000r/min，4℃)，取上清进样分析；所述内标工作溶液中内标为地西泮(100ng/mL)；所述步骤(2)采用液相‑质谱联用检测的步骤包括：(a)液相色谱条件色谱柱：手性色谱柱；流动相：10mmol/L乙酸铵(A)‑乙腈(B)，梯度洗脱程序如下：初始为10％B；0～1.5min，5％B；1.5～4min，5％B；4～13min，18％B；13.01～14min，10％B；(b)质谱条件：质谱采用Agilent 6460三重四极杆串联质谱仪，离子化方式：电喷雾‑正离子(API‑ES)；多反应监测分析模式(MRM)；所述步骤(3)标准曲线制备的步骤包括：分别取右旋雷贝拉唑及其代谢产物系列工作液20μL，加入犬空白血浆(抗凝剂为肝素钠)180μL斡旋混匀，配成系列血浆标准样品；按步骤(1)样品制备的方法制备，取上清按步骤(2)采用液相色谱‑质谱联用检测的方法检测，以分析物的浓度为横坐标，分析物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法(权重为1/x2)进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线；所述步骤(4)犬血浆中右旋雷贝拉唑及其代谢产物浓度测定的步骤包括：将待测血浆按步骤(1)样品制备的方法制备，取上清按步骤(2)采用液相色谱‑质谱联用检测的方法检测，记录分析物对应的峰面积，将分析物与内标物的峰面积比值代入所建的标准曲线中，计算得到所述待测血浆中右旋雷贝拉唑及其代谢产物的浓度。