[发明专利]一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法

摘要

本发明公开的一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法：向黄酮化合物标准品母液中加醋酸盐缓冲液，用分光光度计对其波谱扫描得到对照组图；分别用五种胺盐与黄酮化合物标准品母液在醋酸盐缓冲液中反应，用分光光度计波谱扫描反应物，将结果与对照组图比较；在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液，经循环伏安法检测得电化学发光基准图；在五个毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液并加入五种溶液，经循环伏安法检测得五种对照图，经对比得到电化学发光信号最强的叔胺衍生化反应试剂；在进行后续处理完成检测。本发明毛细管电泳电化学发光检测方法具有样品消耗少及分析结果不受样品氧化干扰的优点。

主权项

1.一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1、吸取黄酮化合物标准品母液，向吸取的黄酮化合物标准品母液中添加醋酸盐缓冲液，经混合后得到溶液Ⅰ‑A，用紫外分光光度计对溶液Ⅰ‑A进行波谱扫描，获得对照组图Ⅰ‑A；分别采用二甲胺、二乙胺、二丙胺、二丁胺、二戊胺与黄酮化合物标准品母液在醋酸盐缓冲液中反应，得到五种溶液，用紫外分光光度计波谱扫描法分别检验五溶液，并将得到结果与对照组图Ⅰ‑A进行比较，判断是否发生叔胺衍生化反应，所述步骤1具体按照以下步骤实施：步骤1.1、吸取250μL浓度为100mg/L～200mg/L的黄酮化合物标准品母液，向吸取的黄酮化合物标准品母液中添加2500μL醋酸盐缓冲液，经混合后得到溶液Ⅰ‑A，用紫外分光光度计对溶液Ⅰ‑A进行波谱扫描，获得对照组图Ⅰ‑A；分别取五份浓度为100mg/L～200mg/L的黄酮化合物标准品母液，且每份的量均为250μL；先向这五份黄酮化合物标准品母液中均添加2500μL醋酸盐缓冲液；再分别加入二甲胺、二乙胺、二丙胺、二丁胺、二戊胺各80μL，经振荡充分混匀后，静置3min，分别得到溶液Ⅰ‑B‑二甲胺，溶液Ⅰ‑B‑二乙胺、溶液Ⅰ‑B‑二丙胺、溶液Ⅰ‑B‑二丁胺、溶液Ⅰ‑B‑二戊胺；最后用紫外分光光度计分别进行波谱扫描，获得对照组图Ⅰ‑B‑二甲胺，图Ⅰ‑B‑二乙胺、图Ⅰ‑B‑二丙胺、图Ⅰ‑B‑二丁胺、图Ⅰ‑B‑二戊胺；步骤1.2、将步骤1.1中获得的对照组图Ⅰ‑B‑二甲胺、图Ⅰ‑B‑二乙胺、图Ⅰ‑B‑二丙胺、图Ⅰ‑B‑二丁胺及图Ⅰ‑B‑二戊胺分别与对照组图Ⅰ‑A与进行比较，根据吸收峰值的变化，判断是否发生了叔胺衍生化反应；步骤2、在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液，经循环伏安法检测，待稳定后获得电化学发光基准图，即图Ⅱ‑A；分别在五个毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液，再分别加入经步骤1得到的五种溶液，分别经循环伏安法检测，待稳定后获得五种对照图，将得到的五种对照图与图Ⅱ‑A进行对比，确定出电化学发光信号最强的叔胺衍生化反应试剂；步骤3、待步骤1和步骤2完成后，制备出黄酮化合物标准品衍生化母液，并对实验条件进行优化，获得线性范围、检测限、精密度、稳定性及加样相对回收率，以完成毛细管电泳电化学发光检测。