[发明专利]高产手性D-(-)-乙偶姻的谷氨酸棒杆菌菌株及构建及应用

摘要

本发明公开了高产手性D‑(‑)‑乙偶姻的谷氨酸棒杆菌菌株及构建及应用，构建方法为：(1)在谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC 13032中敲除ldh基因，pta‑ack基因操纵子，nagD基因和butA基因；在染色体上的乙酸生成pta‑ack位点，插入Ptuf强启动子过表达的合成支路alsSD操纵子；(2)用载体pEC‑XK99E连接合成支路alsSD操纵子得到pEC‑XK99E‑alsSD质粒，删除其lacIq区域,得到pEC‑XK99E‑SD‑△lacIq，导入步骤(1)获得谷氨酸棒杆菌中。本发明菌株安全，用葡萄糖在有氧条件下生产乙偶姻。

主权项

一种高产手性D‑(‑)‑乙偶姻的谷氨酸棒杆菌菌株构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)在谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC 13032中敲除副产物乳酸生成途径ldh基因，副产物乙酸生成途径pta‑ack基因操纵子，副产物甘油生成途径nagD基因和消耗乙偶姻生成2,3‑丁二醇途径的butA基因；在染色体上的乙酸生成pta‑ack位点，插入Ptuf强启动子过表达的合成支路alsSD操纵子；(2)用大肠杆菌‑谷氨酸棒杆菌穿梭载体pEC‑XK99E连接合成支路alsSD操纵子得到pEC‑XK99E‑alsSD质粒，通过PCR手段删除pEC‑XK99E‑alsSD质粒的lacIq区域,得到pEC‑XK99E‑SD‑△lacIq质粒，将所述pEC‑XK99E‑SD‑△lacIq质粒导入到步骤(1)获得的谷氨酸棒杆菌中，得到高产手性D‑(‑)‑乙偶姻的谷氨酸棒杆菌菌株。