[发明专利]一种珍珠母蛋白N16的制备方法在审
| 申请号： | 201710225045.2 | 申请日： | 2017-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN107058333A | 公开（公告）日： | 2017-08-18 |
| 发明（设计）人： | 姚宏亮;徐祯彦;彭维;苏薇薇;刘玉铃;林嘉碧;邓沁;李沛波;王永刚 | 申请（专利权）人： | 中山大学;东莞中山大学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/435;C07K1/16;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙)44326 | 代理人： | 刘新年,黄开艳 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种珍珠母蛋白N16的制备方法。该方法利用PCR法扩增N16基因，扩增所得N16基因连接到表达载体pET32a上，并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysE，用于表达N16蛋白；优选单克隆作为种子培养基接入发酵体系培养，待大肠杆菌BL21(DE3)plysE生长到对数期，加入异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷，诱导N16表达，收集表达菌体；将表达菌体在pH 6.5～8.5的条件下进行包涵体分离，经凝胶排阻层析纯化得珍珠母蛋白N16。本发明在现有技术的基础上进一步优化了工艺条件，使产量、纯度更高，操作更为简便易行，并实现了与工业生产的接轨。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 珍珠母 蛋白 n16 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种珍珠母蛋白N16的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)利用PCR法扩增N16基因，扩增所得N16基因连接到表达载体pET32a上，并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysE，涂布于平板并挑取表达效力高的单克隆，用于表达N16蛋白；(2)优选单克隆，接种至基础培养基培养，作为种子培养基；(3)再将种子培养基接种于发酵体系基础培养基，待大肠杆菌BL21(DE3)plysE生长到对数期，加入异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷，诱导N16表达，收集表达菌体；(4)分离纯化步骤：将表达菌体在pH 6.5～8.5的条件下进行包涵体分离，经凝胶排阻层析纯化得珍珠母蛋白N16。
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