[发明专利]云南木鳖组织培养快速繁殖的方法

摘要

本发明提供了云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，涉及植物生物工程技术领域。本发明按以下步骤进行（1）选取云南木鳖优质嫩茎尖为外植体；（2）外植体嫩茎尖采用酒精和升汞消毒处理清洗后，备用；（3）带1‑2个的茎段接种于诱导培养基上，培养时间50‑60d，茎节处抽生大量丛生芽；（4）将丛生芽切成茎段接种于继代增殖培养基中培养；（5）将丛生芽切成单株接种于生根培养中培养；（6）生根苗株高在3‑5cm，置于自然光下炼苗15‑20d后，进行移栽。本发明不仅使云南木鳖种苗保持母株的优良性状，而且还提高了种苗繁殖系数，为云南木鳖工厂化生产奠定基础。

主权项

云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体选择：选择生长健壮、无病虫害的幼嫩茎段，去除多余叶片，放入0.1%的洗衣粉或洗洁剂中浸泡3‑5min，在自来水中冲洗10‑15 min，用纯净水清洗1‑2次；(2)消毒处理：将外植本放入玻璃瓶中，置于超净工作台上，用浓度75%的酒精消毒30‑40s，用无菌水冲洗1次，再置于0.08‑0.1%氯化汞溶液中灭菌5‑8 min，然后用无菌水冲洗5‑6次，放在无菌过滤纸上吸干水分，备用；(3)诱导培养：将处理好的外植体切成长2‑3cm，带1‑2节的茎段，接种于诱导培养基中培养，诱导培养基组分为：N6+6‑BA1.0‑1.5mg/L+NAA0.05‑0.1 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8‑6.0，暗培养5‑7d，光照强度为1600‑1800lx，光照时间8‑10h/d，培养温度（25±2℃），养时间50‑60d，诱导大量的丛生芽；(4)继代增殖培养：将丛生芽中的小芽长至4cm以上，切成带1‑2节的茎段，接种于继代增殖培养基中培养，继代增殖培养基组分为：N6+6‑BA0.5‑1.0mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L+马铃薯泥2‑5%+活性炭1‑2g /L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8‑6.0，光照强度为1800‑2000lx，光照时间10‑12h/d，培养温度（25±2℃），培养15‑20d，分化出丛生芽长2‑3cm，培养时间60‑70d，丛生芽长4‑6cm；(5)生根培养：将丛生芽小芽长至2cm以上，切成单株接种于生根培养基中培养，生根培养基组分为：N6+6‑BA0.3‑0.6mg/L+NAA0.2‑0.5mg/L+香蕉泥5‑10%+活性炭2‑3g /L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8‑6.0，光照强度为2000‑2200lx，光照时间10‑12h/d，培养温度（25±2℃），培养时间50‑60d，获得带根茎叶完整小植株苗；(6)炼苗与移栽：将株高3‑5cm，根长2‑4cm，生根数在3根以上时，置于自然光温室大棚苗床上炼苗15‑20d后，取出生根苗，洗净根部的培养基，置于1000倍多菌灵溶液浸泡5‑7 cm，捞出晾干至根发白，移栽于腐质土：火烧土：腐熟艾蒿体积比为5：3：2的混合基质中，荫蔽度80‑85%，相对湿度70‑80%，温度22‑30℃，移栽10d后，用低浓度MS母液喷洒。