[发明专利]一种重组人溶菌酶的反相高效液相色谱分析方法

摘要

本发明公开了一种重组人溶菌酶反相高效液相色谱分析方法，该方法以孔径20～50nm、粒径2～10μm的十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，既可以让重组人溶菌酶这种大分子蛋白在柱上有一定的保留时间，又不会让该蛋白与填料结合过强而导致无法洗脱；通过在流动相中添加氯化钠，从而保证在反相高效液相色谱分析过程中重组人溶菌酶的溶解性，使其能够与流动相完全混溶，保证了色谱峰的踏板数、对称性、重复性、定量分析的准确度，可用于重组人溶菌酶的分析与定量检测。

主权项

1.一种重组人溶菌酶的反相高效液相色谱分析方法，其特征在于它由下述步骤组成：（1）将重组人溶菌酶标准品溶解于质量浓度为0.9%的氯化钠超纯水溶液中，配制成重组人溶菌酶标准品溶液，采用反相高效液相色谱对标准品溶液进行分析，色谱分析条件：色谱柱为C18反相色谱柱，填料为孔径20～50 nm、粒径2～10 µm的十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A是氯化钠质量浓度为0.9%、三氟乙酸体积浓度为0.1%的超纯水溶液，流动相B是乙腈与超纯水体积比为6:4的混合液且混合液中含有质量浓度为0.9%的氯化钠和体积浓度为0.1%的三氟乙酸，进行梯度洗脱，流动相梯度选择0到30分钟A:B由55:45到5:95，检测波长为280 nm，流速为1 mL/分钟；绘制色谱主峰面积随重组人溶菌酶浓度变化的标准曲线；（2）将待测重组人溶菌酶样品溶解于质量浓度为0.9%的氯化钠超纯水溶液中，用滤膜过滤，收集滤液，采用反相高效液相色谱对滤液进行分析，色谱分析条件与步骤（1）相同；（3）根据步骤（2）得到的色谱主峰面积，结合步骤（1）确定的标准曲线的线性方程即可得到待测重组人溶菌酶样品中重组人溶菌酶的浓度。