[发明专利]一种提取大型真菌基因组DNA的方法

摘要

一种提取大型真菌基因组DNA的方法，利用物理方法和化学方法破碎大型真菌子实体或菌丝细胞结构，采用酚、氯仿和异戊醇去除蛋白质，再用异丙醇沉淀基因组DNA，加入灭菌蒸馏水或缓冲液溶解基因组DNA，采用核酸吸附柱吸附收集基因组DNA，经异硫氰酸胍和乙醇纯化，获得基因组DNA，获得的基因组DNA具有较好的完整性，经琼脂糖凝胶电泳后染色，DNA条带清晰且单一，无拖尾，无杂带，获得的基因组DNA纯度高，其OD260和OD280比值在1.8～2.0之间，产量高，基因组DNA的浓度为20～50ng/μl，操作简单、成本低，适用于各种大型真菌子实体和菌丝的分子生物学研究。

主权项

一种提取大型真菌基因组DNA的方法，包括以下步骤：1)破碎细胞将大型真菌的子实体或菌丝在液氮中研磨，研磨结束后加入试剂Ⅰ，震荡，水浴，离心，取上清液；其中，所述的试剂I中各组分及含量为：Tris‑HCl 100～400mM，NaCl 100～400mM，EDTA 10～40mM，SDS细胞裂解液0.3～0.6wt.％，乙烯聚吡咯烷酮0.1～1wt.％，pH＝7.7～8.0；2)去除蛋白质、抽提基因组DNA向步骤1)的上清液中加入试剂Ⅱ，混匀，离心，取上清液；其中，所述试剂Ⅱ中按体积比含有：苯酚：氯仿：异戊醇＝25：20～24：1～2；3)沉淀、溶解基因组DNA加入异丙醇，混匀，离心，舍弃上清，保留沉淀，再加入试剂Ⅲ，混匀，然后加入试剂Ⅳ，溶解所提取的DNA，混匀；其中，所述试剂Ⅲ为灭菌蒸馏水或1×TE缓冲液；试剂Ⅳ中含有：异硫氰酸胍6～10M，Tris‑HCl 20～60mM，EDTA 30～60mM，聚乙二醇辛基苯基醚10～40mM；4)纯化基因组DNA将步骤3)的混合液移入核酸吸附柱中，静置，离心，提取物吸附至核酸吸附柱，弃滤液；向核酸纯化柱中加入试剂Ⅴ，离心，弃去滤液，再加试剂Ⅵ，离心，弃去滤液；其中，所述的试剂Ⅴ包括异硫氰酸胍6～10M，Tris‑HCl 20～60mM；试剂Ⅵ包括；Tris‑HCl 20～60mM，NaCl 100～400mM，乙醇70～75vol％；5)洗脱基因组DNA将核酸纯化柱安置于离心管内，离心，向核酸纯化柱中加入试剂Ⅲ，静置，离心，获得所述大型真菌基因组DNA。