[发明专利]一种山茶藻斑病病原的分离和培养方法

摘要

本发明公开了一种山茶藻斑病病原的分离和培养方法，涉及病原的分离和培养领域。包括病斑采集、消毒处理、分离培养、病原纯化、培养病原藻五个步骤，另外本发明还提供了培养山茶藻斑病病原的Chu10营养液和Chu10营养基。本发明的有益效果在于：本发明山茶藻斑病病原的分离和培养方法，它能快速有效的将山茶藻斑病病原分离和培养，防止受到细菌和真菌的污染，整个过程污染少，周期短，纯化效果好。

主权项

一种山茶藻斑病病原的分离和培养方法，其特征在于：包括病斑采集、消毒处理、分离培养、病原纯化、培养病原藻，具体步骤如下：步骤一：病斑采集：采集新鲜的病叶标本装入洁净的保鲜袋，带回实验室用自来水冲洗20‑30min，备用；步骤二：消毒处理：选择步骤一中病斑较多的叶片，在超净工作台无菌环境下，用无菌剪刀剪下直径4‑6mm的病组织圆片，用体积比75％的酒精处理20‑30s，然后用无菌水冲洗4‑6次，备用；步骤三：分离培养：将步骤二中经无菌水冲洗的病组织用无菌滤纸吸取表面水分，然后用镊子将病组织分别放入到Chu10营养基或营养液中，编号、密封后放入到温度22‑28℃的光照培养箱内，按照光照12h，黑暗12h进行培养7‑10d，观察其变化；步骤四：病原纯化：待步骤三中培养的病组织周围有疑似藻类产生，分别将藻类似物在装有Chu10营养基的培养皿上斜45度角涂抹4‑5次，做好标记，放入到温度22‑28℃的光照培养箱内，按照光照12h，黑暗12h进行培养，得到藻类病原；步骤五：培养病原藻：将步骤四中分离得到的藻类病原，转接到Chu10营养液中，然后在温度22‑28℃、光照12h、黑暗12h的条件下以50‑100r/min的转速摇床振荡培养7‑10d，最终得到纯化的山茶藻斑病病原。