[发明专利]一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库的方法在审
| 申请号： | 201710245652.5 | 申请日： | 2017-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN108728476A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 刘贇;徐值姣;应天雷 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属生物技术领域及基因工程技术领域，涉及抗体制备技术，具体涉及一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库从而筛选高亲和力抗体的方法。该方法利用CRISPR系统的剪切及后续NHEJ修复的途径，实现对抗体基因的可变区区域产生蛋白质序列的多样性，从而产生新抗体文库，为后续抗体筛选做准备。本发明方法比以往用易错pcr来形成抗体库及定向突变碱基替代等方法改进抗体库相比，产生的抗体库容大且多样化，打破抗体筛选时库容的限制，本方法通过调节CRISPR的表达，可循环产生新文库直至筛选出理想抗体，操作周期短，成本低，方便灵活。 | ||
| 搜索关键词： | 抗体筛选 抗体文库 系统产生 抗体库 多样性 抗体 文库 高亲和力抗体 基因工程技术 抗体制备技术 生物技术领域 筛选 蛋白质序列 操作周期 定向突变 碱基替代 剪切 易错pcr 可变区 可循环 新抗体 修复 对抗 基因 灵活 改进 | ||
【主权项】：
1.一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建质粒，包括选择性表达含有CRISPR系统的质粒及选择性表达抗体基因的展示质粒；(2)转化质粒以及阳性克隆的选择，得到含有上述质粒的细胞株；(3)诱导CRISPR系统对抗体序列的剪切及修复，获得多样性新抗体文库；(4)诱导新抗体文库的表达及展示；(5)抗体的富集及高亲和力抗体的筛选。
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