[发明专利]一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法

摘要

一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法，属于复合生物材料制备领域，包括胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)体外培养、丝素蛋白纳米纤维膜的制备、胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)的接种。本发明制得的胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料取材的便利，不涉及社会伦理等问题，可以加快皮肤修复，具有优良的组织修复的功效。

主权项

一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：机械剥除胎盘羊膜组织，将剥离后剩下的绒毛组织，过质量浓度75％的酒精，再用PBS冲洗洗尽血渍，并将其剪成1mm2小块后，浸没于含有质量浓度0.1％的IV型胶原酶的低糖基础培养基中，37℃消化15‑45分钟,得细胞组织液；步骤二：细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管，1200rpm离心lOmin，弃上清液后接种于含有质量浓度10％的胎牛血清的低糖基础培养基中，于37℃、5％CO2的培养箱中培养5天后进行第一次换液，随后每隔两天进行换液，待细胞融合至90％使用质量浓度0.25％的胰酶进行消化，得胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)；步骤三：将2L去离子水烧热至沸腾，加入4g碳酸钠及5g家蚕生丝，煮沸30min后，用去离子水清洗干净并烘干，再用9.3mol/L的LiBr溶液溶解蚕丝，溶解浓度20wt％，待完全溶解后将溶液装入透析袋，去离子水透析72h，9000r/min离心20min，重复两次，得丝素蛋白溶液；步骤四：将丝素蛋白溶液注入聚乙烯皿中，自然风干后获得丝素蛋白膜；步骤五：将丝素蛋白膜溶于质量浓度98％甲酸中，然后装入注射器中进行静电纺丝，纺丝针头内径0.9mm，调整纺丝电压在10‑15KV，距离在8‑15cm，速度为0.1‑O.5m/h，获得丝素蛋白纳米纤维膜；步骤六：取生长状况良好的胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)接种于丝素蛋白纳米纤维膜上，接种时间为2‑12h，即得胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料。