[发明专利]一种秋石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明提供一种秋石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法，是以秋石斛兰的新芽为外植体，采用丛生芽诱导途径，通过芽长芽达到快速繁殖目的，包括以下步骤：外植体的选择和消毒、丛生芽的诱导培养、丛生芽的增殖培养、生根培养、及试管苗移栽。采用本发明方法仅需5至6个月就能获得秋石斛兰种苗；繁殖过程中不仅诱导率高，而且增殖后无需进行壮苗培养即可进行后续的生根培养，简化了培养环节、降低了培养成本，即增殖效率高，进而提高了整个种苗培养的效率；另外，本发明培养的试管苗健壮、根系发达，且通过驯化炼苗，其环境适应能力较强，从而提高了种苗移栽成活率。

主权项

1.一种秋石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括如下具体操作步骤：(1)外植体的选择与消毒：选择秋石斛兰健康母株为外植体对象，当新芽萌发1.0～2.0cm时，进行套袋隔离；待新芽具3～5个节时进行取样，去除叶片后，用自来水冲洗干净，之后在超净工作台上采用75％的酒精浸泡30～50s，接着转入0.1％升汞溶液中进行摇床振荡消毒5～6min，然后更换0.1％升汞溶液1次，再摇床振荡消毒4～5min，最后在超净工作台上取出并用无菌水冲洗4～5次，再用无菌纸巾吸干水分，切取带节茎段和茎尖，备用；(2)丛生芽的诱导培养：取步骤(1)切取所得带节茎段和茎尖，并接种到丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导培养，丛生芽诱导培养基的配方为改良MS+6‑苄氨基嘌呤2.0～3.0mg/L+萘乙酸0.1～0.2mg/L+白糖30g/L+琼脂粉5.0mg/L；(3)丛生芽的增殖培养：将步骤(2)诱导获得丛生芽切割成带3～6个小芽的丛芽团，接着把丛芽团接种到增殖培养基中进行增殖培养，培养周期45～50d，增殖系数达5.5～6.6，之后更换增殖培养基进行继代增殖培养，继代增殖培养45～50d得芽大小为0.5～0.8cm的丛芽团，然后继续培养15～20d，即增殖培养60～70d获得健壮的丛生芽；(4)生根培养：将步骤(3)获得的健壮的丛生芽切割成单芽，并接种于生根培养基上进行培养，培养周期75～80d即获得株高6.0～8.0cm、根长2.0～4.0cm、根数3～6条的完整植株，且生根率100.0％；(5)试管苗移栽：移栽前，将步骤(4)获得的瓶苗进行炼苗至适应栽培环境，炼苗完成后用自来水洗苗，洗净根部粘连的培养基，之后将苗置于0.8～1.0g/L杀菌剂溶液浸泡消毒3～5min，取出晾干，然后采用水苔包住根部植入育苗杯中，之后置于22～28℃的温室层架上进行常规栽培管理即可；其中，增殖培养基的组分为：花宝1号12000～16000mg/L、KNO₃ 800～950mg/L、NH₄NO₃ 550～875mg/L、KH₂PO₄ 85～125mg/L、MgSO₄·7H₂O 185～250mg/L、CaCl₂·2H₂O 440mg/L、MnSO₄·H₂O 16.9mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na₂MoO₂·2H₂O 0.25mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂·EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素5.0～8.0mg/L、烟酸2.0～3.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇150～200mg/L、白糖25000～35000mg/L、凝固剂6000～6600mg/L、6‑苄氨基嘌呤1.0～3.0mg/L、及萘乙酸0.1～0.2mg/L；生根培养基的组分为：花宝1号12000～16000mg/L、KNO₃ 600～900mg/L、NH₄NO₃ 500～875mg/L、KH₂PO₄ 85～125mg/L、MgSO₄·7H₂O 185～250mg/L、CaCl₂·2H₂O 220～440mg/L、MnSO₄·H₂O 16.9mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na₂MoO₂·2H₂O 0.25mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂·EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素1.0～3.0mg/L、烟酸1.0～2.0mg/L、盐酸吡哆醇5.0～10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、白糖20000～25000mg/L、凝固剂6300～7000mg/L、吲哚丁酸0.3～0.5mg/L、萘乙酸0.1～0.3mg/L、活性炭500～800mg/L、及香蕉泥50000～100000mg/L。