[发明专利]人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体提供一种人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法，是将β‑丙内酯与水痘病毒浓缩液按体积比1：2000～1：8000混合，在3～5℃条件下灭活12～36h，随后在34～37℃条件下水解1.5～3h，得到灭活病毒液；灭活病毒液经纯化、分装、冻干后制备成灭活疫苗。本方法制备的水痘病毒灭活疫苗安全、有效，接种反应轻微，对不适用减毒活疫苗的免疫功能低下的人群更适用。

主权项

人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将人胚胎成纤维细胞传代不超过34代；(2)当细胞扩增到融合度90％以上时，将水痘病毒接种到细胞中进行感染；(3)将感染了水痘病毒的细胞加入含有2％～5％胎牛血清的最低必须培养基中，置于34～37℃细胞培养箱培养；(4)观察细胞病变程度，待致细胞病变效应达到50％以上时，倒掉培养基，用磷酸盐缓冲溶液洗涤细胞；(5)加入0.02％‑0.05％的EDTA溶液洗脱感染细胞，将细胞悬液离心处理，去掉上清，合并、混匀，单瓶取样做无菌检测，‑65～‑80℃冻存；(6)将检测无菌的样品进行超声破碎，离心，收集上清液，即病毒原液；(7)采用超滤膜包对病毒原液进行超滤浓缩；(8)检测超滤浓缩后的病毒液蛋白含量和病毒滴度；(9)将β‑丙内酯与蛋白含量为35～95mg/mL、病毒滴度不小于4.0lgPFU/mL的病毒浓缩液按体积比1：2000～1：8000混合，在3～5℃条件下灭活12～36h，随后在34～37℃条件下水解1.5～3h，得到灭活病毒液；(10)采用柱层析纯化灭活病毒液，得到灭活病毒纯化液；(11)将灭活病毒纯化液在人胚胎成纤维细胞至少盲传3代，检测病毒滴度，结果均应无空斑形成。(12)分装、冻干灭活病毒纯化液即得水痘病毒灭活疫苗。