[发明专利]精子顶体酶的快速提取方法及其活性的流式检测方法

摘要

本发明公开了精子顶体酶的快速提取方法及其活性的流式检测方法，特点是提取方法包括将精液加入到离心管中，离心吸去精浆部份，保留下层精子沉淀，然后加入破膜液，使精子沉淀团均匀悬浮后，离心去掉上清，然后加入提取液，使精子悬浮，再离心3收集上清，即获得顶体酶提取物，其活性的流式检测方法为通过多肽或蛋白微球偶联技术和多肽或蛋白荧光标记技术，采用将顶体酶酶切底物进行荧光标记后连接到微球上，一定粒径的荧光微球能被流式细胞仪所识别，荧光强弱直接反应了样本中顶体酶活性的高低，优点是通过快速提取和流式检测结合，使得检测效率大大提高，增加了检测的灵敏性。

主权项

一种精子顶体酶的快速提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将含有7.5*106个精子数目的精液加入到离心管中，于10000rpm离心2min，吸去离心后管内的精浆部份，保留下层精子沉淀；(2)在含有精子沉淀的离心管中加入200uL破膜液，使精子沉淀团均匀悬浮后，于7000rpm离心2min后，去掉上清，然后加入400uL提取液，使精子于37℃悬浮10min，再于12000rpm离心3min后，收集上清，即获得顶体酶提取物，其中每100ml破膜液中含磷酸二氢钠1.2g，Triton‑100 0.2‑0.4ml和叠氮钠0.05g；每100ml提取液中含BSA 1g、氯化钠0.35g、磷酸一氢钠1.19g、二水磷酸二氢钠0.25g和叠氮钠0.05g。