[发明专利]微载体悬浮培养细胞生产猪伪狂犬gE基因缺失病毒疫苗的方法

摘要

本发明涉及用BHK细胞系生产猪伪狂犬gE基因缺失病毒灭活疫苗的方法，其包括以下步骤：将BHK21细胞复苏，采用低血清培养基进行微载体培养，然后以细胞维持液替换低血清培养基，进行灌流连续培养，使细胞密度维持在1.5～3×107个/ml时接毒，48h后收获病毒液，连续收获6天，将收获的病毒液进行浓缩、灭活、除菌，制成成品疫苗。所述的疫苗效价高，具有较强的免疫原性，不需要添加免疫增强剂即可达到好的免疫效果，经免疫后可促进体内分泌中和抗体，免疫保护率达到100％，完全达到疫苗效力评价标准。

主权项

一种微载体悬浮培养BHK细胞生产猪伪狂犬gE基因缺失病毒疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将种子细胞BHK21进行复苏，然后接种至搅拌式生物反应器中，采用低血清培养基进行微载体悬浮培养，培养条件为：转速30～50r/min，溶氧40～60％、pH值7.2～7.3、温度36.5～37.5℃，培养至细胞的浓度为1.5～3╳107个/ml；(2)沉降微载体和细胞，以细胞维持液替换低血清培养基，进行灌流连续培养，培养条件为：转速60～80r/min，溶氧30～50％、pH值7.4～7.5、温度35～37℃，灌流速度为1～2个反应器体积/天，同时以同样的速率泵出细胞悬浮液，保证细胞在反应器中停留时间内扩增至1.5～3╳107个/ml；(3)将猪伪狂犬gE基因缺失病毒按照感染复数为0.01，接种至连续培养的BHK21细胞反应器中进行培养，培养条件为：转速40～50r/min，溶氧40～50％、pH值7.4～7.5、温度35.5～36.5℃，接毒12h后开始灌流，灌流速度为1个反应器体积/天，接毒48h后开始收获病毒液；(4)将收获的病毒液进行浓缩、灭活、除菌，即得。