[发明专利]一种异种脱细胞真皮基质的制备方法

摘要

本发明涉及一种异种脱细胞真皮基质的制备方法，其包括以下步骤：以巴马香猪皮为皮源，皮鼓反取成断层皮片，经过去皮、脱细胞等步骤处理得到脱细胞真皮，进一步将脱细胞真皮与羧甲基壳聚糖进行反应制成脱细胞真皮基质，最后经柔化剂、保湿剂的处理，使制得的脱细胞真皮基质更接近人体皮肤的自然状态，提高其使用的依从性。经本发明方法制得的异种脱细胞真皮基质免疫原性低，并有保持真皮胶原纤维的三维结构的立体构造，提高真皮胶原纤维的三维结构的稳定性，且具有较佳的生物相容性。

主权项

一种异种脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选用巴马香猪皮为皮源，对取皮区进行脱毛、消毒，用取皮机取下大张皮肤，无菌生理盐水清洗，皮鼓反取成0.25～0.5mm的断层皮片，采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，备用；(2)将步骤(1)制得的断层皮片浸泡于0.5～1.0％(m/v)的邻苯基苯酚钠水溶液中，处理6～8min，无菌生理盐水清洗3～4次，然后加入1～2％(m/v)三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液，超声震荡处理6～12h，每2h更换一次溶液，其中加入的三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液与断层皮片的重量比为10:1，得到去表皮的真皮；(3)将步骤(2)得到的去表皮的真皮置于0.2～0.4％TritonX‑100(v/v)溶液中，室温下振荡洗涤6～12h，用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次，加入脱细胞处理液，在37℃条件下作用12～24h，所述的脱细胞处理液与去表皮的真皮的重量比为10:1，用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次，再用无菌生理盐水清洗3～4次，得到脱细胞真皮；(4)将步骤(3)得到的脱细胞真皮放入转鼓中，然后分次加入温度为35℃、pH为5.7的羧甲基壳聚糖溶液，反应30min后调节pH值至5.0，再反应75min，调节pH值至6.8，处理完毕后放净废液，再将处理后的材料用无菌生理盐水洗2次，每次15分钟，洗后控干水，得到脱细胞真皮基质；(5)将经步骤(4)处理得到的脱细胞真皮基质浸泡于体积浓度为0.1～0.3％(v/v)的戊二醛溶液中交联15～30min，无菌生理盐水冲洗10～15min，然后置于柔化剂溶液中浸泡30～60min，清洗后再放入保湿剂溶液中，37℃保温处理30～60min，最后用无菌生理盐水充分冲洗去除残留；(6)将经步骤(5)处理得到的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机的冷冻室内冻干后，成型包装，再经γ射线辐照消毒灭菌，即为成品。