[发明专利]一种快速驯化贴壁细胞为全悬浮细胞系的方法在审
| 申请号： | 201710330836.1 | 申请日： | 2017-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN108865967A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 关明旭;和彦良;王宇菲;苏玮玮;张树成 | 申请（专利权）人： | 华威特（江苏）生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 顾进 |
| 地址： | 225300 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速驯化贴壁细胞成为全悬浮细胞系的方法，将低传代健康贴壁细胞直接接种到无血清、无微载体培养基的转瓶中驯化培养；当细胞适应了大于6rpm转瓶机的转速，转到摇瓶中，用新鲜培养基将细胞起始密度调整至5x105细胞/mL，摇瓶转速调整为10‑40rpm；如果4‑5天后细胞密度增长达不到1x106细胞/mL，将细胞离心沉淀后用新鲜无血清、无微载体培养基将细胞密度调整在5x105细胞/mL后继续驯化培养，反复这一驯化步骤直到细胞密度在4‑6天后≥10倍增长，经过10代以上摇瓶传代驯化培养，即可获得全悬浮细胞系，该方法简便，快速，重复性好，成功率高，全悬浮细胞系稳定并且对病毒的感染性不变。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 全悬浮 贴壁细胞 驯化培养 驯化 摇瓶 传代 密度调整 培养基 微载体 无血清 新鲜培养基 细胞离心 细胞适应 转速调整 感染性 转瓶机 转瓶 成功率 沉淀 接种 病毒 新鲜 健康 | ||
【主权项】：
1.一种快速驯化贴壁细胞为全悬浮细胞系的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：1）将低传代健康贴壁细胞直接接种到无血清、无微载体培养基的转瓶中驯化培养；2）当细胞适应了大于6rpm转瓶机的转速，即细胞密度增长达到1x106细胞/mL后，将细胞转到摇瓶中，用新鲜无血清、无微载体培养基将细胞起始密度调整至5x105细胞/mL，摇瓶转速调整为10‑40rpm；3）如果4‑5天后细胞密度增长达不到1x106细胞/mL，将细胞离心沉淀后用新鲜无血清、无微载体培养基将细胞密度调整在5x105 细胞/mL后继续驯化培养，反复这一驯化步骤直到细胞密度在4‑6天后≥10倍增长，即可完成驯化培养；4）按照上述驯化培养，经过10代以上摇瓶传代驯化培养后，即可获得稳定的全悬浮细胞系。
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