[发明专利]用于检测HER2基因的FISH探针、其制备方法及应用在审
| 申请号： | 201710338896.8 | 申请日： | 2017-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN107245514A | 公开（公告）日： | 2017-10-13 |
| 发明（设计）人： | 许宝芝;秦颖;白蛟腾;杨凯丽 | 申请（专利权）人： | 德路通（石家庄）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/10;C12N15/11 |
| 代理公司： | 石家庄旭昌知识产权代理事务所(特殊普通合伙)13126 | 代理人： | 彭随丽 |
| 地址： | 050000 河北省石家*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于检测HER2基因的FISH探针的制备方法，利用两对引物、分别进行两步PCR获得探针，FISH探针包括有标记荧光染料的、针对HER2基因的第一组探针和针对人类17号染色体着丝粒区域的第二组探针，第一组探针与第二组探针所标记的荧光染料颜色不一样。本发明进行两步PCR获得探针，如果第一次PCR体系的扩增产生了错误片断，则第二次PCR体系的扩增能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低，因此，增加了扩增特异性。同时通过两步PCR放大，提高了探针制备效率且降低了生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 检测 her2 基因 fish 探针 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种用于检测HER2基因的FISH探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：a、提取探针合成模板：利用基因组DNA提取试剂盒提取人类基因组DNA，作为HER2基因以及17号染色体着丝粒区域检测探针合成的模板；b、第一步PCR反应：采用第一组PCR反应引物，以人体基因组DNA为模板，进行PCR体系的扩增，得到DNA产物；c、第二步PCR反应：采用第二组PCR反应引物，以与其对应的第一步PCR反应获得的DNA产物为模板进行PCR体系的扩增，得到第二步PCR反应产物；d、纯化：将第二步PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，采用PCR产物凝胶回收试剂盒进行切胶、回收、纯化，得到检测HER2基因的FISH探针；所述的第一组PCR反应引物包括HER2基因第一组PCR反应引物和17号染色体着丝粒区域第一组PCR反应引物；所述的第二组PCR反应引物包括HER2基因第二组PCR反应引物和17号染色体着丝粒区域第二组PCR反应引物。
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