[发明专利]一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法

摘要

本发明公开了一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法。属于医药检测技术领域，本发明方法主要包括以下步骤：芍药苷肝微粒体的转化；样品前处理；液质联用方法进行肝微粒体中芍药苷代谢物的测定。本发明的优点在于：操作简便，样品处理简单、分析速度快、特异性强、灵敏度高。该方法可以同时检测芍药苷在肝微粒体中更多的代谢产物，且用该分析方法能更多、更准确推测出代谢产物的结构，为研究芍药苷在肝微粒体中的体外代谢产物提供技术支持，对深入研究活性产物及其作用机制具有重要意义。

主权项

1.一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)肝微粒体中芍药苷代谢产物的获得：在培养瓶中，于Tris‑HCl缓冲溶液中，加入肝微粒体、NADP、NADH、G‑6‑P、G‑6‑P DH和MgCl2，混合均匀，在37℃全温振荡器中温孵5min后，加入芍药苷的Tris‑HCl缓冲溶液，得温孵体系；温孵1‑3h，温孵过程中，每20min在液面上通O2半分钟，反应后，将培养瓶从振荡器中取出，迅速加入甲醇终止代谢反应，得芍药苷代谢产物；所述的温孵体系中：肝微粒体浓度为2.0mg/mL，NADP浓度为1.0mmol/L，NADH浓度为0.5mmol/L，G‑6‑P浓度为10.0mmol/L，G‑6‑P DH浓度为1.0IU/mL，Mg2+浓度为4.0mmol/L，芍药苷浓度为0.1mg/mL；2)样品处理：将芍药苷代谢产物涡旋振荡30s，转速5000r/min下离心10min，吸取上清液，旋转蒸干，加入甲醇振荡复溶，再次离心，吸取上清液，在氮气下吹干后，残留物用甲醇复溶，过0.22μm微孔滤膜，进高效液相色谱检测；3)样品测定：芍药苷代谢产物的检测，具体条件如下：色谱条件：色谱柱：DiamonsilTM ODS C18流速：0.2mL/min柱温：30℃进样量：1μL检测波长：230nm流动相：A:水+1％的甲酸，B:乙腈+1％的甲酸，采用梯度洗脱，程序如下：质谱条件：一级质谱：电离模式：电喷雾电离(ESI)扫描模式：负离子扫描毛细管电压：2.8kV锥孔电压：3.0V源温度：110℃脱溶剂温度：300℃脱溶剂气体流量：500L/Hr二级质谱：电离模式：电喷雾电离(ESI)扫描模式：负离子扫描碰撞气：氮气毛细管电压：2.8kV锥孔电压：3.0V源温度：110℃脱溶剂温度：300℃脱溶剂气体流量：500L/Hr碰撞能量：15‑35eV。