[发明专利]一种筛选中药神经活性成分的细胞膜固相色谱法及其应用

摘要

本发明公开一种筛选中药神经活性成分的细胞膜固相色谱法及其应用，该方法包括如下步骤：通过液质联用建立待筛选中药苦参提取液指纹图谱；分离与培养背根神经节细胞；利用背根神经节细胞膜固相化结合筛选苦参提取液中的效应成分；洗脱未结合成分；解离并通过液质联用检测活性成分解离液成分。本发明用小鼠DRG细胞固相色谱技术作为抗瘙痒药物初筛的细胞模型，为筛选具有“止痒”作用的中药活性成分提供了新方法，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种筛选中药神经活性成分的细胞膜固相色谱法，其特征在于，包括如下步骤：(1)通过高效液相色谱(HPLC)联用质谱建立待筛选中药苦参甲醇提取液指纹图谱；(2)分离与培养小鼠背根神经节细胞；(3)小鼠背根神经节细胞膜固相化筛选苦参水提取液中的效应成分；(4)洗脱未结合成分，弃去洗脱液；(5)解离得到活性成分解离液；(6)将步骤(5)得到的活性成分解离液进行HPLC分析，通过比较活性成分解离液和步骤(1)得到的苦参甲醇提取液指纹图谱中各吸收峰，确定与小鼠背根神经节细胞特异结合成分的特征峰，得到活性成分的特征峰，从而筛选得到中药神经活性成分；所述步骤(1)与步骤(6)中的HPLC的分析条件为：有机相为乙腈；水相为0.1％氨水；梯度洗脱0～30min，有机相：10～46％；30～40min，有机相：46～90％；40～41min，有机相：90～10％；41～50min，有机相：10％；以上均为体积百分比；进样量：20μL；柱温：25～35℃；检测波长：220nm；流速：1mL/min；所述的HPLC所用的色谱柱为可耐碱性条件的色谱柱。