[发明专利]一种利用Cas9/gRNA系统构建扩增子文库的方法有效
| 申请号： | 201710382859.7 | 申请日： | 2017-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN107058573B | 公开（公告）日： | 2020-07-10 |
| 发明（设计）人： | 易建明;屈武斌;蔡万世;王瑞超;杭兴宜 | 申请（专利权）人： | 艾吉泰康生物科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C40B40/06 |
| 代理公司： | 北京汇知杰知识产权代理有限公司 11587 | 代理人： | 蔡伦 |
| 地址： | 102206 北京市昌平区北京市中关*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用Cas9/gRNA系统构建扩增子文库的方法。该构建方法包括以下步骤：S1，使用多重PCR技术扩增多个目标区域，得到扩增子；S2，采用Cas9/gRNA系统特异性切除所有扩增子和引物二聚体两侧的通用序列，去除引物二聚体；S3，对扩增子的5’端进行磷酸化修饰，3’端添加“A”，采用连接酶将测序接头分别连接到扩增子的5’端和3’端，磁珠纯化后得到扩增子文库。使用Cas9/gRNA系统消化第1轮反应后的扩增子，能有效去除第1轮反应过程中产生的引物二聚体，提高文库的纯度，增强测序信号的信噪比，同时还可以提高测序数据的均一性，降低文库测序的数据量，降低扩增子文库构建的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 cas9 grna 系统 构建 扩增 文库 方法 | ||
【主权项】：
一种利用Cas9/gRNA系统构建扩增子的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：采用多重PCR引物对多个目标区域进行扩增，得到多个扩增子；S2：采用Cas9/gRNA系统对所述扩增子进行消化，特异性切除扩增子和引物二聚体两侧通用序列，去除引物二聚体；S3：依次对所述扩增子进行5’端磷酸化修饰，3’端添加“A”，然后用连接酶将测序接头例如P5和P7连接到扩增子的5’端和3’端；S4：将所述连接后的扩增子磁珠纯化后，得到扩增子文库，然后进行二代测序。
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