[发明专利]一种检测水果中5种萘衍生物的方法

摘要

本发明涉及一种检测水果中5种萘衍生物的方法,本方法包括：标准溶液的配制、样品提取、样品净化和超高效液相色谱测定等四个步骤，本方法以乙腈为样品提取液；NH₂固相萃取小柱净化，含1％‑2％甲酸的二氯甲烷‑乙腈(90:10‑95:5，V/V)为淋洗液；用1.7μm，2.1×100mm C18色谱柱分离，0.1％(v/v)甲酸水溶液‑0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液为流动相；于超高效液相色谱荧光检测器激发波长280nm，发射波长330nm下测定。本方法简便、灵敏、准确，适用于水果中NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME这5种萘衍生物的同时测定。

主权项

1.一种检测水果中5种萘衍生物的方法,其特征在于，包括：1)标准溶液的配制1.0mg/mL标准溶液：分别称取NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME标准品各10.0mg，用甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，分别配制成1.0mg/mL的NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME标准溶液；10mg/L混合标准溶液：分别移取1.0mg/mL的NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME标准溶液各0.1mL混合于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，配制成10mg/L混合标准溶液；混合标准工作溶液：将10mg/L混合标准溶液用含0.1％(v/v)甲酸的体积比为3:7乙腈‑水溶液逐级稀释成0.005、0.01、0.02、0.1和1.0mg/L的混合标准工作溶液，供超高效液相色谱测定；2)样品提取称取10g粉碎好的水果样品于100mL具塞离心管中，加入20.0mL乙腈，涡旋2min，加入5g氯化钠，盖上盖子，剧烈振摇1min，4000r/min离心5min，使乙腈和水相分层；3)样品净化移取10.0mL上层乙腈溶液于100mL梨形瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至干，加入2‑5mL含1％‑2％(v/v)甲酸的体积比为90:10‑95:5二氯甲烷‑乙腈淋洗液溶解残渣，移入用淋洗液活化好的NH₂固相萃取小柱中，收集流出液于50mL鸡心瓶中，再用淋洗液洗涤梨形瓶2次，每次用2‑5mL淋洗液，再移入上述NH₂固相萃取小柱中，合并流出液，在30℃水浴中旋转浓缩至干，用1.0mL含0.1％(v/v)甲酸的体积比为3:7乙腈‑水溶液溶解残渣，经0.22μm微孔滤膜过滤后，得样品溶液，供超高效液相色谱测定；4)超高效液相色谱测定用超高效液相色谱测定1)所得的混合标准工作溶液和3)所得的样品溶液，得到两者的色谱图，通过样品色谱图的保留时间与相应标准样品的保留时间对照定性,当样品色谱图中色谱峰保留时间与标准样品色谱图中的NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME这5种化合物的色谱峰保留时间的相对偏差不大于5％，则定性为检出，其中，所述超高效液相色谱测定的条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18，1.7μm，2.1×100mm；荧光检测波长：激发波长Ex＝280nm，发射波长Em＝330nm；柱温：40℃；进样量：4μL；流速0.2‑0.5mL/min；流动相A为0.1％(v/v)甲酸水溶液，流动相B为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液，梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1，表1 流动相梯度程序