[发明专利]基于量子点标记敌百虫仿生免疫吸附检测方法

摘要

本发明涉及一种基于量子点标记的敌百虫快速检测方法，以量子点标记半抗原作为标记物；是以亲水性分子印迹聚合物膜作为仿生抗体，利用免疫吸附测定原理，建立对敌百虫具有广泛检测范围的快速灵敏检测方法。本发明将分子印迹技术与免疫技术联用建立对敌百虫具有高灵敏度的仿生免疫吸附检测方法，大大缩短了分析时间(比生物免疫分析缩短1.0h)，适用于快速检测敌百虫。本发明成本低廉，灵敏度高，实验操作简单，可广泛应用于各种食品中敌百虫的检测。

主权项

1.一种基于量子点标记的敌百虫仿生免疫吸附检测方法，其特征在于：步骤如下：1)以亲水性分子印迹聚合物膜作为仿生抗体，将量子点标记抗原用浓度为10%甲醇硼酸盐溶液稀释500倍作为量子点标记稀释液用于竞争反应；步骤如下：将96孔酶标板第1行设为空白组，每孔只加200 μL浓度10%甲醇硼酸盐溶液；第2行设为对照组，每孔加100 μL量子点标记稀释液和100 μL浓度10%甲醇硼酸盐溶液；第3‑8行每孔均依次分别加入敌百虫标样梯度稀释液和100 μL量子点标记物稀释液；室温竞争反应1 h，多功能酶标仪读取荧光值；2)样品中加入浓度10%甲醇硼酸盐溶液中超声提取3次，定容后用0.45 μm滤膜过滤得样品提取液；将样品提取液代替步骤1）中所述的敌百虫标样梯度稀释液，重复步骤1）操作，计算出待测物中敌百虫含量；所述量子点标记抗原采用如下方法制备：将敌百虫半抗原、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺和CdSe/ZnS氨基量子点按照200:4000:1~5的摩尔比例依次加入到反应容器中，充分混匀；加入50‑100 μL pH 7.4的硼酸盐缓冲液，避光室温反应2‑10 h；反应结束后，离心除团聚，将反应物超滤浓缩进行分离纯化得到量子点标记抗原，2‑8 ℃下保存；所述分子印迹聚合物膜的制备方法为：1.028 g敌百虫溶于8 mL水和12 mL乙腈，然后加入0.688 g甲基丙烯酸磁力搅拌30 min后加入1.508 mL二甲基丙烯酸乙二醇酯和0.08 g偶氮二异丁腈，磁力搅拌1 h；在96孔酶标板上每孔加入200 µL上述混合溶液氮气环境下反应18 h；用7:1 v/v甲醇‑醋酸溶液超声8 h除去敌百虫，再用浓度100%甲醇洗4 h至中性，37℃干燥2 h后得到分子印迹聚合物膜。